酵母细胞壁分离试剂盒产品说明书

主要用途
酵母细胞壁分离试剂是一种旨在使用化学和物理方法相结合，快速且充分裂解酵母细胞壁，通过反复清洗，萃取完整而纯化的可溶性细胞壁成分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可直接用于后续多糖或糖蛋白分离、单体成分定量等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取效果好。
 
技术背景
酵母细胞壁在细胞生长和分裂时，决定着细胞的形态和完整性。酵母细胞壁是一种动力结构，由多糖和蛋白，例如葡聚糖（glucan）、甘露聚糖（mannan）、 甲壳素（chitin）等构成的超分子网络，适应酵母生理和形态变化，包括单倍体细胞接合（conjugation）、孢子形成（sporulation）或假菌丝形态（pseudohyphal growth）等。酵母细胞壁的分离通常采用化学法和生物酶解法，从而获得完整或特异的胞壁成分，纯度可达85%。

产品内容
清理液（Reagent A）        550毫升
平衡液（Reagent B）        250毫升
酸珠液（Reagent C）        2克
净化液（Reagent D）    50毫升
萃取液（Reagent E）        10毫升
保存液（Reagent F）        50毫升
产品说明书        1份

保存方式
保存在4℃冰箱里, 有效保证6月

用户自备
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
分光光度仪：用于测定酵母细胞浓度
涡旋震荡仪：用于裂解酵母细胞壁

实验步骤
1．准备好50毫升新鲜酵母样品（注意：通过选择性培养液培养获得酵母细胞）
2．在分光光度仪上测定OD600（注意：建议达到1 OD，即1 X 107细胞/毫升；总量为5 X 108细胞）
3．转移到预冷的50毫升锥形离心管
4．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
5．小心抽去上清液
6．加入12.5毫升清理液（Reagent A），混匀
7．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
8．小心抽去上清液
9．重复实验步骤6至8一次
10．加入10毫升平衡液（Reagent B），混匀
11．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
12．小心抽去上清液
13．加入500微升平衡液（Reagent B）
14．加入0.1克酸珠液（Reagent C）
15．在4℃环境下，持续强力涡旋震荡2分钟，间歇1分钟
16．重复实验步骤15五次
17．小心移取上清液（500微升）到新的15毫升锥形离心管（收集管）
18．加入500微升平衡液（Reagent B）到上述含有酸珠液（Reagent C）的锥形离心管
19．涡旋震荡5秒
20．小心移取上清液（500微升）合并到上述收集管
21．重复实验步骤18至20二次
22．将收集管（总量为2毫升上清液）放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3800g
23．小心抽掉上清液（注意：必须抽干液体），保留沉淀颗粒――此为细胞壁成分
24．加入500微升净化液（Reagent D），混匀
25．转移到1.5毫升离心管
26．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g
27．小心抽掉上清液（注意：必须抽干液体）
28．重复实验步骤24至27三次
29．加入500微升萃取液（Reagent E），混匀
30．100℃温度下，孵育10分钟
31．室温下静置10分钟
32．重复实验步骤30一次
33．放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为20000g
34．小心抽掉上清液
35．加入500微升保存液（Reagent F），混匀
36．放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为20000g
37．小心抽掉上清液
38．重复实验步骤35至37二次
39．加入200至500微升保存液（Reagent F），混匀
40．放进－70℃的冰箱里备用
41．或放入冰槽里，继续各种后续操作

注意事项
1．本产品为20次操作
2．所有操作均须在4℃状态下进行
3．细胞生长切莫过度，否则影响蛋白表达和细胞裂解
4．酸珠液（Reagent C）为固体状，移取方法为：使用1毫升枪头，将尖端部分剪去；或使用0.5毫升PCR管的盖子内圈盛满；或秤重0.1克
5．50毫升（0D600＝1）菌液湿重约1克
6．50毫升（0D600＝1）菌液可获得约250毫克湿重的胞壁成分，其中94％为多糖，5％为蛋白
7．本产品提取的细胞壁成分纯度可达85%以上。如果获取100%高纯的细胞壁，建议使用真菌/酵母细胞细胞壁高纯分离试剂盒——G&VS60142
8．制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，避免反复冻融
9．本公司提供系列酵母细胞制备试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定无蛋白酶污染

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称        规格        
G&VS60073    酵母细胞壁分离试剂盒    20次
G&VS60073A    清理液（Reagent A）        500毫升
G&VS60073B    平衡液（Reagent B）        500毫升
G&VS60073C    酸珠液（Reagent C）        10克
G&VS60073D    净化液（Reagent D）    100毫升
G&VS60073E    萃取液（Reagent E）        50毫升
G&VS60073F    保存液（Reagent F）        100毫升

试剂盒订购信息
产品编号            名称                规格
G&VS12061.1    裂解液IX：真菌/酵母细胞裂解液            50次
G&VS12061.2    裂解液IX：真菌/酵母细胞超强裂解液        20次
G&VS60014.1    真菌/酵母细胞可溶性总蛋白制备试剂盒        20次
G&VS60014.2    真菌/酵母细胞可溶性总核蛋白制备试剂盒        20次
G&VS60014.3    真菌/酵母细胞浆可溶性总蛋白制备试剂盒        20次
G&VS60072.1    真菌/酵母细胞壁可溶性总蛋白制备试剂盒        20次
G&VS60072.2    真菌/酵母细胞壁完全可溶性总蛋白制备试剂盒    20次
G&VS60073    真菌/酵母细胞细胞壁分离试剂盒            20次
G&VS60142    真菌/酵母细胞细胞壁高纯分离试剂盒        10次
G&VS30043.1    可溶性真菌/酵母细胞膜蛋白（粗提）制备试剂盒    20次
G&VS30043.2    可溶性真菌/酵母细胞膜蛋白（纯提）制备试剂盒    20次
G&VS30043.3    可溶性真菌/酵母细胞膜蛋白相位分离制备试剂盒    20次