CAT#:JW-980804
常温运输及保存

真菌 RNA 纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点    
本产品专门用于真菌 RNA 的纯化 ，它具有下列特点：
1.   柱式操作 ，更加简单快捷 ，整个过程只需要约 30 分钟。
2.   RNA  纯度高，OD260/280一般都在 2.0 左右，可直接用于 RT-PCR、 Northern 杂交、 microarray hybridization、  cDNA 合成等实验。
3.   RNA 产量高 ，一般在  20-70 μg/mL 酵母培养物(约 2E7 个细胞)。
4.   非酶细胞破裂法 ，适用于各种形态和各个种属的真菌 ，包括 Candida albican、
Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomycespombe、Pichia pastoris 等。
5.   本产品足够 50 次微量纯化实验。
6.   本产品只能用于科研。
规格及成分    
本产品采用大扁盒包装    
成 份            编 号        规 格    包装材料    
真菌 RNA 纯化溶液 A        980804a        20 mL    30 mL 本色瓶    
真菌 RNA 纯化溶液 B        980804b        25 mL    30mL 棕色玻璃瓶    
真菌 RNA 纯化溶液 C        980804c        75 mL    125 mL 本色瓶    
真菌 RNA 纯化溶液 D        980804d        25 mL    30 mL 本色瓶    
离心吸附柱        220144        50 套    塑料袋    
通用洗柱液        220143        50 mL    60 mL 本色瓶    
RNA 洗脱液        971207        10 mL    10 mL 本色瓶    
使用手册            980804sc        1 份    1 份    

运输及保存：常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂：氯仿

使用方法    
1.  将 50 mg 左右的干菌丝(或 100 mg 左右的鲜菌丝、适当数量的真菌菌落)转移到 1.5  mL 塑料离心管中 。如果是液体真菌培养物 ，则直接将 1-10 mL 液体真菌在 1.5 mL  塑料离心管中 12,000-15,000×g 离心 1 分钟，并弃尽液体培养基（可以分多次离心）。
2.  加入 0.4 mL 真菌 RNA 纯化溶液 A 并充分吹打混匀。如果真菌 RNA 纯化溶液 A 存放 时产生沉淀 ，请置于 65℃融化 ， 用前充分摇晃均匀。
3.  加入 0.4 mL 溶液 B ，剧烈振荡 30 秒。
4.  65℃保温 5 分钟。
5.  室温 12,000-15,000×g 离心 3-5 分钟，转移上清到一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。
6.  再加入 0.1 mL 真菌 RNA 纯化溶液 B 和 0.1 mL 自备氯仿 ，振荡混匀 30 秒。
7.  室温 12,000-15,000×g 离心 3-5 分钟，转移上清到一自备的、干净的 5 mL 塑料离心管中。
8.  加入相当于上清 3 倍体积的真菌 RNA 纯化溶液 C（约 1.2-1.5 mL） 和 1 倍体积的 溶液 D（约 0.4-0.5 mL） ，充分混匀。
9.  将混合液（约 2.5 mL） 分 3-4 次转移到离心吸附柱中 。每次 13,000-15,000×g 室 温离心半分钟 ，弃收集管中的穿透液。
10. 用 0.5 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中 ，室温离心半分钟 ，弃收集管中的穿透液。
11. 一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5 mL 通用 洗柱液重复此步一次。
12. 室温离心半分钟 。 此步十分重要 ，否则残留的洗柱液会影响 RNA 的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 1.5 mL 塑料离心管中 ，加入 30-100  μL RNA 洗脱液。
14. 室温离心半分钟 ，离心管中溶液即为 RNA 样品 ，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交 ，强烈建议用户使用甲醛变性胶 进行 RNA 电泳。
16. RNA 产量产率测定 ：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH 7.5-8.2 之间)检测其在  OD260 的光吸收 。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL）， 进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/真菌用量)。注意不要将 RNA  稀释在 DEPC 水中检测 OD260和 OD280，否则光吸收比在 TE 中测得的低 10%-15%。
17. RNA 纯度测定 ：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与 其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在 2.0-2.3 之间，如果低 于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染 ，但一般不影响 RT-PCR 等反应 。蛋白质污染可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除 ，DNA 和多糖污染 可以分别用多糖清除剂去除 。测 OD 时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有 效范围 ，如果低于一起的检测范围 ，该读数无效。
关联产品：真菌 DNA 纯化试剂盒