CAT#:JW-220642-30
常温运输及保存，有低温成分   

水样DNA纯化试剂盒

产品及特点
水样中含有0.22 μm可过滤物（主要是直径小于0.22 μm的病毒DNA和裸露的DNA片段）和不可过滤物（主要是直径大于0.22 μm的细菌、真菌等微生物）。本产品可以用上述两部分分别纯化DNA，也可以不分这两部分，直接用水纯化总DNA。本产品具有下列特点：
1.本产品足够各15次两种过滤物的DNA提取（共30次），0.22 μm可过滤物的DNA提取一次可以处理50 mL的水样。0.22μm不可过滤物的DNA提取一次可以处理50 mL-5 L的水样。
2.操作简单，整个过程室温操作约40分钟，适合大规模水样处理。
3.安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
4.由于水样所含DNA很少，所以得到的DNA一般不能用于电泳检测，只能用于PCR检测或其他扩增检测。
5.性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。

规格及成分
成份            编号        规格    包装
水样DNA纯化浓缩液A        220642a        23 mL    30mL棕色瓶
水样DNA纯化洗涤液B        220642b        250 mL    250 mL本色瓶
水样DNA纯化溶解液C        220642c        18 mL    30 mL本色瓶
载体DNA，10 mg/mL     220642d        1.5 mL    1.5 mL白盖管
酸洗玻璃珠（800 μm）    100307D        10g    10mL本色瓶
上柱结合液        990602-40        30 mL    30 mL本色瓶
离心吸附柱        220144        30套    塑料袋
通用洗柱液        220143-50        30 mL    30mL本色瓶
DNA洗脱液（胶回收专用）    220125        10 mL    10 mL本色瓶
使用手册            220642sc        1份    无

本产品使用大扁盒包装
运输及保存：常温运输及保存，有效期一年。DNA载体需要低温运输，-20℃保存。

自备试剂
0.22 μm滤膜和滤器、250 mL塑料瓶、50 mL塑料离心管、15 mL塑料离心管、1.5 mL塑料离心管

使用方法
一：水样的过滤
1.如果需要提取水样的0.22 μm可过滤部分的DNA，则需要用自备的0.22μm滤膜和滤器一次过滤50 mL水样，弃滤膜，穿透部分直接用方法A纯化DNA。
2.如果需要提取水样的0.22 μm可过滤部分的DNA，则需要用自备的0.22μm滤膜和滤器过滤50 mL-5 L的水样，弃穿透部分，取下滤膜，用1.5 mL自备超纯水洗涤滤膜表面的非过滤物到一培养皿中，再用移液枪将洗脱物转移到1.5 mL塑料离心管中，15000 g离心10分钟，弃上清，沉淀直接用方法B纯化DNA。
3.如果不需要分0.22 μm可过滤部分和0.22 μm不可过滤部分的DNA，则取50 mL水样按直接用方法A纯化总的DNA。

二、纯化方法A（0.22 μm可过滤部分的DNA纯化）
4.将50 mL过滤所得的样品转移到50 mL塑料离心管中，100℃水浴加热10分钟以裂解病毒和其他小于0.22 μm的微生物，然后冷却至室温。注意：不能使用玻璃器皿。
5.加入0.1 mL DNA载体，充分颠倒10次摇晃均匀。
6.加入1.5 mL水样DNA浓缩液，充分颠倒摇晃10次。
7.室温静置10分钟，此步非常关键，不能省略。
8.8000 rpm常温离心10分钟（需要50 mL台式离心机）。
9.小心移弃上清（此上清可以暂时保留直到实验结束，以免丢掉DNA）。不要移弃管底离心面的DNA沉淀（此沉淀也许看不见）。
10.加入15 mL水样DNA洗涤液，震荡半分钟混匀后，8000 rpm常温离心5分钟。
11.小心移弃上清，注意不要触及管底离心面的DNA沉淀（此沉淀也许看不见）。
12.在管中加入0.6 mL水样DNA溶解液，振荡30秒混匀后。注意：水样DNA溶解液在4℃放置后可能会产生沉淀，如果有沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
13.加入0.8 mL上柱结合液到离心管中，吹打混匀后转移一半的混合液（0.8 mL）到硅胶膜离心吸附柱中，室温放置2分钟。
14.13,000 rpm室温离心1分钟（需要1.5 mL台式离心机），弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
15.将剩余的另外一半裂解液（0.8 mL）转移到硅胶膜离心吸附柱中，室温放置2分钟。
16.12,000 rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
17.加入0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
18.加入0.3 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
19.12,000 rpm室温离心1分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。
20.将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的1.5 mL离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30 μL DNA洗脱液（胶回收专用），然后室温放置2分钟。
21.12,000 rpm室温离心1分钟，离心管中的溶液即为水样DNA溶液。
22.DNA样品可以直接用于PCR或其他扩增，也可放-20℃长期保存。

三、纯化方法B（0.22 μm不可过滤部分的DNA纯化）
23.在0.22 μm不可过滤样品的沉淀中加入0.6 mL水样DNA溶解液，充分震荡混匀。
24.如果有超声破碎仪，则用超声破碎仪破碎细胞，强度根据所用仪器推荐的针对真菌的强度和频率。如果没有超声破碎仪，则用冻融法加机械破碎法：加入100 mg本试剂盒提供的酸洗玻璃珠，充分震荡10分钟后放-20℃或-80℃冻5-10分钟直到凝固。化冻后再震荡10分钟后放-20℃或-80℃冻5-10分钟直到凝固。
25.12000-15000 g室温离心5分钟。
26.将上清转移到新的1.5 mL新离心管中。
27.后续操作接上述第13步。
关联产品：柱式液体样品RNA纯化试剂盒