组织透明质酸含量比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
组织透明质酸含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过生物酶处理，高盐萃取可溶性透明质酸，再与溴化二苯并噻碳氰类染料结合，呈现紫色，由分光光度仪比色分析，定量检测组织样品中透明质酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种人体或动物组织（皮肤、肌肉等）、软骨、结缔组织、肿瘤组织等样品透明质酸水平检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。

技术背景
透明质酸（hyaluronic acid或Hyaluronan）是一种非硫酸化糖胺多糖（glycosaminoglycan），为细胞外基质的主要成分，广泛分布在结缔组织、上皮组织和神经组织中，与细胞繁殖、迁移、组织流体动力学（hydrodynamics）以及肿瘤发展等有关。透明质酸为二糖多聚体，通过β1-4和β1-3糖苷键将D-葡糖醛酸（D-Glucuronic acid）和N-乙酰氨基葡萄糖（N-acetylglucosamine）链接起来，由25000二糖重复体构成，分子量5000至20000000Da不等。透明质酸常用于组织工程、组织修复和护肤等。经过生物酶去蛋白处理，高盐萃取透明质酸，再与溴化二苯并噻碳氰类染料结合（3,3’-Diethyl-9-methyl-4,5,4’,5’-dibenzothia carbocyanine bromide），呈现紫色，通过分光光度仪（655nm波长）测定，来定量分析透明质酸的总含量。
 
产品内容
酶解液（Reagent A）         10毫升
沉淀液（Reagent B）         60毫升
溶解液（Reagent C）         20毫升
高盐液（Reagent D）       2毫升
强化液（Reagent E）           4毫升
清理液（Reagent F）         10毫升
染色液（Reagent G）       5毫升
标准液（Reagent H）    100微升
产品说明书               1份

保存方式
保存酶解液（Reagent A）在—20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent G）避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月

用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
2毫升离心管：用于样品操作的容器
微型台式离心机：用于样品操作
200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于比色分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤
一、样品预处理  
1．手术取出动物组织，并秤重以确定50毫克（皮肤或软骨）至250毫克（软组织）组织重量
2．移入到一个液氮冻存管
3．即刻放进液氮罐过夜
4．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
5．放进一个2毫升离心管
6．加入400微升酶解液（Reagent A）
7．强力涡旋震荡1分钟，充分混匀
8．放进55℃恒温水槽孵育16小时
9．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
10．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
11．加入1毫升沉淀液（Reagent B）（注意：使用前避免摇晃）
12．涡旋震荡15秒
13．室温下静置15分钟
14．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
15．小心抽去上清液
16．加入360微升溶解液（Reagent C）
17．涡旋震荡，直至充分溶解颗粒群
18．加入40微升高盐液（Reagent D），混匀
19．加入95微升强化液（Reagent E），混匀
20．室温下静置30分钟
21．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
22．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
23．加入1毫升沉淀液（Reagent B），混匀（注意：使用前避免摇晃）
24．室温下静置15分钟
25．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
26．小心抽去上清液
27．重复实验步骤16至26一次
28．加入500微升清理液（Reagent F）（注意：避免混匀）
29．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
30．小心抽去上清液（注意：避免液体残留）
31．空气中干化
32．加入100微升溶解液（Rreagent C）
33．涡旋震荡，直至充分溶解颗粒群
34．置于冰槽里备用或放进—70℃冰箱里保存

二、标准样品配制
1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
2．分别加入50微升溶解液（Reagent C）到1至5号管
3．移取50微升标准液（Reagent H）到1号管，混匀
4．小心移取50微升1号管稀释的标准液（Reagent H）到2号管，混匀
5．小心移取50微升2号管稀释的标准液（Reagent H）到3号管，混匀
6．小心移取50微升3号管稀释的标准液（Reagent H）到4号管，混匀
7．将1至5号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表

管号    溶解液（Reagent C）        标准液（Reagent H）    标准透明质酸含量
1    50微升            50微升            2微克/20微升
2    50微升            50微升1号管        1微克/20微升
3    50微升            50微升2号管        0.5微克/20微升
4    50微升            50微升3号管        0.25微克/20微升
5    50微升            0            0

三、标准曲线测定
1．移取20微升上述配制的标准液（Reagent H）到新的比色皿
2．加入200微升染色液（Reagent G）
3．枪头吹打混匀
4．室温下孵育10分钟，避免光照
5．即刻放进分光光度仪检测（波长655nm）：获得标准样品吸光读数
6．重复实验步骤1至5四次
7．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准透明质酸含量（微克）

四、样品测定
1．加入20微升上述制备的待测样品到新的比色皿
2．加入200微升染色液（Reagent G）
3．枪头吹打混匀
4．室温下孵育10分钟，避免光照
5．即刻放进分光光度仪检测（波长655nm）：获得样品吸光读数
6．根据上述标准曲线获得样品对应透明质酸含量（微克）

五、浓度计算
【根据上述标准曲线样品对应透明质酸含量（微克）X 样品稀释倍数】÷0.020（样品容量；毫升）＝微克透明质酸/毫升
注意事项
1．本产品为25次操作，包括标准样品
2．本产品检测范围为0至3微克
3．本产品不适合于酶水解的二糖或四糖降解片段（包括血液和尿液样品）、培养细胞样品的检测
4．操作时，须戴手套
5．试剂具有腐蚀性，注意操作安全
6．系统操作时，标准样品测定只需1次
7．孵育时，避免光照
8．如果样品透明质酸含量过低，可以浓缩样品或增加样品量至50微升
9．样品浓度可以表述为：微克透明质酸/组织重量；微克透明质酸/组织总蛋白等
10．小鼠、大鼠和兔的组织透明质酸含量11微克至510微克/克组织，其中皮肤含量最高
11．本公司提供系列透明质酸检测试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息

编号        名称                规格    
G&VS19276.2    组织透明质酸含量比色法定量检测试剂盒    20次
G&VS19276.2A    酶解液（Reagent A）            50毫升
G&VS19276.2B     沉淀液（Reagent B）            100毫升
G&VS19276.2C     溶解液（Reagent C）            50毫升
G&VS19276.2D     高盐液（Reagent D）        10毫升
G&VS19276.2E     强化液（Reagent E）            10毫升
G&VS19276.2F     清理液（Reagent F）            50毫升
G&VS19276.2G     染色液（Reagent G）        10毫升
G&VS19276.2H     标准液（Reagent H）        1毫升

试剂盒订购信息
产品编号        名称                    规格
G&VS19275.1    细胞透明质酸含量光度法定量检测试剂盒        20次
G&VS19275.2    组织透明质酸含量光度法定量检测试剂盒        20次
G&VS19275.3    体液透明质酸含量光度法定量检测试剂盒        20次
G&VS19275.4    发酵产物透明质酸含量光度法定量检测试剂盒    20次
G&VS19275.5    保健品透明质酸含量光度法定量检测试剂盒        20次
G&VS19275.6    化妆品透明质酸含量光度法定量检测试剂盒        20次
G&VS19276.1    细胞透明质酸含量比色法定量检测试剂盒        20次
G&VS19276.2    组织透明质酸含量比色法定量检测试剂盒        20次
G&VS19276.3    体液透明质酸含量比色法定量检测试剂盒        20次
G&VS19276.4    发酵产物透明质酸含量比色法定量检测试剂盒    20次
G&VS19276.5    保健品透明质酸含量比色法定量检测试剂盒        20次
G&VS19276.6    化妆品透明质酸含量比色法定量检测试剂盒        20次
G&VS19277.1    细胞透明质酸含量酶消化法定量检测试剂盒        20次
G&VS19277.2    组织透明质酸含量酶消化法定量检测试剂盒        20次
G&VS19277.3    体液透明质酸含量酶消化法定量检测试剂盒        20次
G&VS19277.4    发酵产物透明质酸含量酶消化法定量检测试剂盒    20次
G&VS19277.5    保健品透明质酸含量酶消化法定量检测试剂盒    20次
G&VS19277.6    化妆品透明质酸含量酶消化法定量检测试剂盒    20次
G&VS19278.1    细胞透明质酸含量高效液相色谱法定量检测试剂盒    20次
G&VS19278.2    组织透明质酸含量高效液相色谱法定量检测试剂盒    20次
G&VS19278.3    体液透明质酸含量高效液相色谱法定量检测试剂盒    20次
G&VS19278.4    发酵产物透明质酸含量高效液相色谱法定量检测试剂盒    20次
G&VS19278.5    保健品透明质酸含量高效液相色谱法定量检测试剂盒    20次
G&VS19278.6    化妆品透明质酸含量高效液相色谱法定量检测试剂盒    20次