转基因大豆 GTS40-3-2 品系基因定性检测试剂盒产品说明书

主要用途
转基因大豆 GTS40-3-2 品系基因定性检测试剂是一种旨在根据品系特异性转基因分子标志和内源性保守序 列设计引物，针对种子、食品、饲料等样本 DNA 进行 PCR 扩增，获得特异性条带，来识别或定性鉴定其 转基因大豆成分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于各种种子、 食品、饲料等大豆品系 GTS-40-3-2 的鉴定。可用于后续测序、载体克隆等实验。产品即到即用，性能稳定， 操作简便，扩增特异。

技术背景
转基因农产品（genetically modified organism；GMO）成为食品安全的重要问题，标记和监测作为市场准入  的法律依据。 目前至少有 40 多种转基因农作物作为食品使用，其中大豆（soybean）是常见品种之一。由  美国孟山都（Monsanto）公司开发的品系 GTS-40-3-2，1996 年进入市场，其商标名称为 RoundReady Soybean   （RRS），已经有 100 多种品种（varieties）。品系 GTS-40-3-2 由花椰菜花叶病毒（cauliflower mosaic virus） 35S 启动子（promoter）、矮牵牛（Petunia hybrida）的叶绿体转运肽（chloroplast transit peptide；CTP）基  因和叶绿体转运肽 4 前导序列（leader sequence）、抗草甘膦（glyphosate）基因 5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-   磷酸合成酶基因（5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase ；EPSPS）、根癌农杆菌（Agrobacterium   tumefaciens）胭脂氨酸合酶（nopaline synthase；NOS）转录终止子等外源性基因元素构成，通过 PV-GMGT04   载体转化到大豆品种 A5403 而成。其中 CT4 EPSPS 基因，（1365 碱基，编码 456 氨基酸），作为功能性抗  草甘膦基因，是品系 GTS-40-3-2 的分子标记。通过 CT4 EPSPS 基因交界片段和大豆内源性凝集素（lectin） 基因的引物设计，扩增其特异产物，进行识别、定性、定量鉴定种子、食品、饲料等转基因大豆成分。

产品内容    
扩增液（Reagent A）        微升
品系引物液（Reagent B）    微升
补充液（Reagent C）    毫升
大豆引物液（Reagent D）    微升
产品说明书        1 份

保存方式
保存在－20℃冰箱里；有效保证 6 月

用户自备    
PCR 级矿物油：用于封隔反应液
PCR 仪：用于样品扩增
PCR 管或平板：用于 PCR 反应的容器
琼脂糖凝胶电泳：用于扩增后电泳分析

实验步骤
实验开始前，从－20℃冰箱中取出试剂，放进冰槽里融化。然后进行下列操作：
1 ．针对一个样本，每次移出xx 微升扩增液（Reagent A）到 PCR 管
2 ．加入 1 微升用户自备的的待测 DNA 样品（总量 100 至 200 纳克）
3 ．加入 xx 微升品系引物液（Reagent B）或大豆引物液（Reagent D）
4 ．再加入 xx 微升补充液（Reagent C）（反应总量为 25 微升）
5 ．即刻放进微型台式离心机瞬时离心 5 秒，速度为 500g（或 2000RPM；例如 eppendorf 5415）
6 ．（选择步骤）加入 50 微升用户自备的 PCR 级矿物油（注意：参见注意事项9）
7 ．即刻进行热启动 PCR 反应：

温度 (℃)        时间        循环
95        2 分钟        1
95        30 秒    
60        30 秒        35 至 40
70        30 秒    
70        5 分钟        1

8 ． 反应完毕后，移取 5 微升进行 1.8%琼脂糖凝胶电泳：
                片段大小        GeneID
大豆内源性基因产物            117 碱基        K00821
GTS-40-3-2 转基因大豆基因产物        180 碱基        AJ308514
9 ． 如果继续测序鉴定，胶回收 PCR 产物（建议使用高质纯化胶回收试剂盒；G&VS20007.2）
10 ．进行后续的测序反应

注意事项
1 ． 本产品为 20 次操作
2 ． 操作时，须戴手套
3 ． 建议使用带滤芯的枪头，避免污染
4 ． 在－20℃冰箱里储存的产品避免反复冻融
5 ． 出现大豆扩增条带：证明为大豆或含有大豆的样品
6 ． 出现品系扩增条带：证明为 GTS-40-3-2 转基因大豆或含有转基因成分的样品
7 ． 可以将扩增产物纯化后，克隆到质粒中，然后进行测序
8 ． 如果需要测序，可以订购测序引物
9 ． 根据用户 PCR 仪的性能，决定是否加入矿物油（Mineral Oil）
10 ．本公司提供系列转基因生物分析试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定无核酶污染
3 ．本产品经鉴定检测特异

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告） 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组份订购信息
编号                                                    名称                                                     规格
G&VS19078. 1. 1       转基因大豆 GTS40-3-2 品系基因定性检测试剂盒         20 次
G&VS19078. 1. 1A     扩增液（Reagent A）                                                    毫升
G&VS19078. 1. 1B     品系引物液（Reagent B）                                            毫升
G&VS19078. 1. 1C     补充液（Reagent C）                                                   毫升
G&VS19078. 1. 1D     大豆引物液（Reagent D）                                            毫升
G&VS19078. 1.2        转基因大豆 GTS40-3-2 品系基因定量检测试剂盒         20 次

试剂盒订购信息
产品编号                                        名称                                                            规格
G&VS19078. 1. 1    转基因大豆 GTS40.3.2 品系基因定性检测试剂盒           20 次
G&VS19078. 1.2     转基因大豆 GTS40.3.2 品系基因定量检测试剂盒           20 次
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