隐孢子虫（Cryptosporidium）涂片免疫荧光染色试剂盒产品说明书

主要用途
隐孢子虫（Cryptosporidium）涂片免疫荧光染色试剂是一种旨在通过荧光探针标记的抗隐孢子虫单克隆抗体特异性地使固着处理的虫卵细胞染色，呈现球形绿色荧光的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种隐孢子虫种系（哺乳动物、鸟类动物、爬行动物、鱼类动物等）的定性检测。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，检测敏感，荧光清晰。
 
技术背景
隐孢子虫（Cryptosporidium），属于顶器亚门（Apicomplexa）孢子虫类（Sporozoa），是一种普遍存在的原生动物类（protozoan）球虫寄生虫（coccidian parasite），，哺乳动物胃肠道致病性生物。隐孢子虫具有9.1Mb基因组；表面糖蛋白GP900在感染过程中发挥主要功能。隐孢子虫通过有性或无性繁殖，产生卵囊（oocysts），其内含有传染性的芽孢子（sporozoite），侵入胃肠道上皮组织（epithelial tissue），常见于儿童和免疫缺陷性病人为易感人群，通过水源、食物污染或粪口接触性传染，导致隐孢子虫病（cryptosporidiosis）的爆发，即水样便症状。最低感染量为30个卵囊，平均为132个。抗酸性染色显微镜检测、免疫荧光染色检测和PCR扩增基因检测是识别和鉴定隐孢子虫的基本方法。

产品内容
（Reagent A）      80毫升
（Reagent B）      5毫升
（Reagent C）    5毫升
（Reagent D）    1.5毫升
（Reagent E）    100微升
产品说明书    1份

保存方式
保存封阻液（Reagent C）、稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent E），避免光照；有效保证6月

用户自备
微型台式离心机：用于样品操作
荧光显微镜：用于观察荧光染色情况
 
实验步骤
1．准备好1毫升待测样品（1 X 106总量）到1.5毫升离心管
2．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为1500g
3．小心抽去上清液
4．加入1毫升清理液（Reagent A）
5．涡旋震荡10秒，混匀细胞颗粒群
6．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为1500g
7．小心抽去上清液
8．加入500微升固着液（Reagent B）
9．涡旋震荡10秒，混匀细胞颗粒群
10．室温下孵育15分钟
11．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为1500g
12．小心抽去上清液
13．加入1毫升清理液（Reagent A）
14．涡旋震荡10秒，混匀细胞颗粒群
15．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为1500g
16．小心抽去上清液
17．重复实验步骤13至16一次
18．加入500微升封阻液（Reagent C）
19．涡旋震荡10秒，混匀细胞颗粒群
20．室温下，暗室里孵育20分钟
21．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为1500g
22．小心抽去上清液
23．加入1毫升清理液（Reagent A）
24．涡旋震荡10秒，混匀细胞颗粒群
25．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为1500g
26．小心抽去上清液
27．重复实验步骤23至26一次
28．加入100微升稀释液（Reagent D）
29．涡旋震荡10秒，混匀细胞颗粒群
30．加入10微升染色液（Reagent E），混匀
31．室温下，暗室里孵育30分钟
32．加入1毫升清理液（Reagent A），混匀
33．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为1500g
34．小心抽去上清液
35．重复实验步骤32至34一次
36．加入100微升清理液（Reagent D）
37．涡旋震荡10秒，混匀细胞颗粒群
38．移取20微升到载玻片上
39．（选择步骤）复染或封片
40．即刻置于荧光显微镜下观察染色情况（400至1000倍放大倍数）：激发波长495nm，散发波长519nm
阳性细胞呈现球形绿色荧光
 
注意事项
1．本产品为10次操作
2．操作时须戴手套
3．操作时，严格无菌操作
4．本产品适合各种隐孢子虫种系（哺乳动物、鸟类动物、爬行动物、鱼类动物等）染色
5．试剂瓶务必密封保存
6．染色液（Reagent E）－20℃低温保存，避免光照
7．染色时，避免光照
8．阳性图像可见绿色发亮的球形染色；标准隐孢子虫染色见下图：
9．本公司提供系列隐孢子虫检测试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定荧光清晰
 
使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称                    规格
G&VS18070.4    隐孢子虫（Cryptosporidium）涂片免疫荧光染色试剂盒        10/20次
G&VS18070.4A     （Reagent A）                      100毫升
G&VS18070.4B    （Reagent B）                    10毫升
G&VS18070.4C    封阻液（Reagent C）                    10毫升
G&VS18070.4D    （Reagent D）                    5毫升
G&VS18070.4E    染色液（Reagent E）                    200微升
试剂盒订购信息

产品编号            名称                        规格
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G&VS18048.1.2    污水隐孢子虫（Cryptosporidium）基因定性检测试剂盒            20次
G&VS18048.1.3    果类隐孢子虫（Cryptosporidium）基因定性检测试剂盒            20次
G&VS18048.1.4    饮料隐孢子虫（Cryptosporidium）基因定性检测试剂盒            20次
G&VS18048.1.5    粪便隐孢子虫（Cryptosporidium）基因定性检测试剂盒            20次
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