乙酸(AA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：
本试剂盒用于测定样本中乙酸(AA)的含量。

实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中乙酸(AA)水平。用纯化的乙酸(AA)抗体包被 微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入乙酸(AA)，和 HRP 标记的乙酸(AA)抗原， 使它们竞争结合，，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的乙酸(AA) 的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品 中乙酸(AA)的含量。

试剂盒组成
1    30 倍浓缩洗涤液        20ml×1 瓶    
2    酶标试剂            6ml×1 瓶    
3    酶标包被板        12 孔×8 条
4    显色剂 A 液        6ml×1 瓶    
5    显色剂 B 液        6ml×1 瓶
6    终止液            6ml×1/瓶
7    样品稀释液        6ml×1/瓶
8    标准品 S1（1200ng/L）    0.5ml×1 瓶
    标准品 S2（600ng/L）    0.5ml×1 瓶
    标准品 S3（300ng/L）    0.5ml×1 瓶
    标准品 S4（150ng/L）    0.5ml×1 瓶
    标准品 S5（75ng/L）        0.5ml×1 瓶
9    说明书            1 份
10    封板膜            2 张

标本要求
1 ．标本处理：
（1）水样   采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查
（2）组织   样品用丁醇： 甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相 关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验， 可将标本放于-20℃保存，备查
2．不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤
1.     加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、 待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2.     加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。
3.     温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。
4.     配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.     洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。
6.     显色：每孔先加入显色剂 A50μl ，再加入显色剂 B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
7.     终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8.     测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。

注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1 小时后方可使用，酶标包被板开封后如未用完， 板条应装入密封袋中保存。
2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4 ． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数 ( ×n×5）。
5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6 ．底物请避光保存。
7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9 ．本试剂不同批号组分不得混用。

检测范围：
30 ng/L -1500ng/L

规格：
96 人份/盒

保存条件及有效期
1 ．试剂盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 个月