CAT#：JW-231119 常温运输和保存
细菌鞭毛蛋白纯化试剂盒

产品及特点    
细菌鞭毛蛋白可以作为疫苗佐剂，具有重要的应用价值。传统的纯化细菌鞭毛蛋白的 方法多需要使用超速离心或者层析交换，步骤非常繁琐，使用不便，为此本公司开发了不 需要超速离心和层析交换的细菌鞭毛蛋白快速纯化试剂盒 ，它具有下列特点：
1.   只有洗涤和沉淀两步 ，简单快捷。
2.   所得细菌鞭毛蛋白纯度高 ， 完整性好。
3.   回收效率高 ，一般能得到相当于总蛋白量 6%的鞭毛蛋白。
4.   可用于 Escherichia coli，Salmone altyphimurium，Salmonela typhi， Citrobacterfreundi等细菌。
5.   本产品需要冷冻高速离心机。
6.   本产品足够 20 次细菌鞭毛蛋白纯化 ，每次可以处理 1 L 饱和菌液。
7.   本产品只能用于科研。
规格及成分    
本产品由一个扁盒和一个大立盒组成 ，大立盒包装 ，编号 231119pt1 ，常温运输和保存

成分            编号        规格        包装
10×细菌鞭毛蛋白纯化洗涤液    2311 19a        250 mL        250 mL 本色瓶
使用手册            2311 19sc        1 份        1 份
本产品由一个扁盒和一个大立盒组成 ，大扁盒包装 ，编号 231119pt2 ，常温运输和保存

成分            编号        规格        包装
细菌鞭毛蛋白纯化沉淀剂    231119b        250 g×2        500 mL 干粉瓶
使用手册            2311 19sc        1份        1份

运输及保存：常温运输和保存 ，有效期一年。
自备试剂：超纯水、 PBS 缓冲液（ pH 7.4） ，透析耗材。

使用方法    
1.   实验前取将适量的 10×细菌鞭毛蛋白洗涤液用自备的超纯水稀释 10 倍后得到 1×细
菌鞭毛蛋白洗涤液 ，放冰上待用。
2.   收集 1 L 过夜培养的细菌饱和培养液（ OD600 在 0.6 左右即可） ， 5,000×g 室温 离心 10 分钟后弃上清。
3.   在细菌沉淀中加入 200 mL 自备的  PBS 缓冲液（ pH 7.4 ） ，充分混匀得到细菌重 悬液。
4.   5,000×g 室温离心 10 分钟 ，小心弃除上清。
5.   重复 3-4 步一次。
6.   在细菌沉淀中加入 50 mL 1×细菌鞭毛蛋白洗涤液 ，充分混匀得到细菌重悬液。
7.   将细菌悬浮液转移到 100 mL 烧杯中（或 100 mL 平底塑料平中） 并放入磁力搅拌 子 ，再将 100 mL 烧杯放到一个大烧杯（如 2 L 烧杯） 中间 ， 周边入碎冰固定小烧 杯 ，然后将装有小烧杯的大烧杯放在磁力搅拌器上搅拌 30 分钟。
8.   取出搅拌子，将细菌重悬液转移到离心管中 ， 10,000×g 离心 20 分钟，小心收集含
有细菌鞭毛蛋白的上清液。
9.   将上清液转移到一个 100 mL 干净烧杯中并放入磁力搅拌子 ，再将 100 mL 烧杯放 到一个大烧杯（如 2 L 烧杯） 中间 ，周边入碎冰固定小烧杯，然后将装有小烧杯的大 烧杯放在磁力搅拌器上缓慢搅拌 。搅拌中加入细菌鞭毛蛋白纯化沉淀剂 23.6 g ，待 沉淀剂溶解后停止搅拌 ，静置 45 分钟 。期间细菌鞭毛蛋白将形成沉淀。
10. 取出搅拌子 ，将溶液转移到干净离心管中 ， 4 ℃下 10,000×g 离心 10 分钟。
11. 小心弃除上清 ，所得沉淀为细菌鞭毛蛋白。
12. 由于所得细菌鞭毛蛋白含盐，所以用户需要采用过柱除盐法或透析除盐法除盐 。由于 细菌鞭毛蛋白分子量在 15-40 Kd ，所以需要据此选择合适截留孔径的透析袋 ，在合 适透析液（根据后续实验确定） 中进行过夜透析 。本试剂盒不含相关试剂。
关联产品：His-标记蛋白微量纯化试剂盒