细胞中性脂质尼罗红染色试剂盒产品说明书

主要用途
细胞中性脂质尼罗红染色试剂是一种旨在使用高度脂溶性恶嗪类荧光染料尼罗红染色技术，特异性地使细 胞内中性脂质显示金黄色荧光，以分析细胞样品中性脂质状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心 研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞样本。用于成脂细胞定性、细胞病理学分析（脂质 细胞瘤；LIPOID）和识别（脂肪肉瘤；liposarcoma）等研究。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光 清晰。

技术背景
脂类物质（LIPIDS）是一类脂溶性（疏水性）的自然分子，分为简单脂质包括脂肪酸（FATTY ACID）及 其衍生物甘油一脂、二脂、三脂；复合脂质包括磷脂、糖脂、硫脂以及脂蛋白；和中性脂质包括甘油、固 醇类（STEROL）物质，例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用，是膜结构的组成成分和细 胞信号分子。细胞浆脂滴（lipid droplet）的形成是正常细胞生理过程。脂滴由中性脂质构成，通常为甘油 三酯，作为脂肪酸能量储备；或胆固醇酯（cholesteryl ester），作为过多细胞胆固醇的存储。尼罗红染色剂 （9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一种亲脂性的恶嗪类荧光染料。与中性脂 类物质结合后，在特定激发波长 488nm 的激发下，显示强金黄色荧光（散发波长 540nm）。 其分子式为 C20H18N2O2 ，分子量为 318。

产品内容    
清理液（Reagent A）        毫升
固着液（Reagent B）        毫升
染色液（Reagent C）        微升
稀释液（Reagent D）    毫升
产品说明书        1 份

保存方式    
保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于反应液配制和样品操作的容器 微型台式离心机：用于悬浮细胞的操作
荧光显微镜：用于细胞染色后观察分析

实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent C）冻融，然后移出xx 毫升稀释液（Reagent D）到 1.5 毫升 离心管，加入 xx 微升染色液（Reagent C），混匀后，置入冰槽里，标记为染色工作液，避免光照。然后进 行下列操作。

操作一：细胞载玻片染色
1 ． 取出待测的细胞载玻片
2 ． 小心加上 xx 微升清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面
3 ． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
4 ． 小心加上 xx 微升固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
5 ． 室温下，孵育 5 分钟
6 ． 小心移去载玻片上的固着液（Reagent B）
7 ． 小心加上 xx 微升清理液（Reagent A），清洗样品表面
8 ． 小心移去载玻片上的清理液（Reagent A）
9 ． 小心加上 xx 微升染色工作液，铺满整个载玻片样品表面
10 ．室温下孵育 10 分钟，避免光照
11．放上盖玻片
12 ．即刻在荧光显微镜下观察：激发波长 488nm ，散发波长 540nm（中性脂类物质呈现金黄色）
或激发波长 540nm ，散发波长 590nm（中性脂类物质呈现桔红色）

操作二：24 孔细胞培养板染色
1 ． 小心抽去 24 孔细胞培养板里的培养液
2 ． 小心加入 xx 微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
3 ． 小心抽去清理液（Reagent A）
4 ． 小心加入 xx 微升固着液（Reagent B），覆盖整个生长表面
5 ． 在室温下孵育 5 分钟
6 ． 小心抽去固着液（Reagent B）
7 ． 小心加入 xx 微升清理液（Reagent A），清洗细胞表面
8 ． 小心抽去清理液（Reagent A）
9 ． 小心加入 xx 微升染色工作液，覆盖整个生长表面
10 ．室温下静孵育 10 分钟，避免光照
11．即刻在荧光显微镜下观察：激发波长 488nm ，散发波长 540nm（中性脂类物质呈现金黄色）
或激发波长 540nm ，散发波长 590nm（中性脂类物质呈现桔红色）

操作三：悬浮细胞或脱离细胞染色
1 ． 将悬浮细胞或脱离细胞（1 X 106 细胞）移入到 1.5 毫升离心管
2 ． 放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g（或 2000RPM ，例如 eppendorf 5415）
3 ． 小心抽去上清液
4 ． 加入 x 微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
5 ． 放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g（或 2000RPM ，例如 eppendorf 5415）
6 ． 小心抽去上清液
7 ． 加入 xx 微升染色工作液，混匀细胞颗粒群
8 ． 室温下孵育 10 分钟，避免光照
9 ． 移出 50 微升到载玻片上，放上盖玻片
10 ．即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长 488nm ，散发波长 540nm（中性脂类物质呈现金黄色）
或激发波长 540nm ，散发波长 590nm（中性脂类物质呈现桔红色）

注意事项
1 ． 本产品为 50 次（细胞载玻片）和 25 次（1 个 24 孔板）操作
2 ． 操作时，须戴手套
3 ． 所有操作在室温下进行
4 ． 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm 培养皿，和各种培养孔板，须相应 调整处理液：

操作容器        建议操作体系
载玻片        200 微升
载玻片培养皿    1 毫升
35mm 培养皿    1 毫升
96 孔培养板    100 微升
48 孔培养板    200 微升
24 孔培养板    400 微升
12 孔培养板    1 毫升
6 孔培养板        2 毫升
25cm2 细胞培养瓶    3 毫升
5 ． 染色工作液新鲜配制，即刻使用，不宜保存
6 ． 染色液（Reagent C）的工作液使用比例：1 毫升体系可以使用 10 微升（1：100 容量比）
7 ． 每次更换试剂溶液时，保持样品表面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
8 ． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满细胞表面
9 ． 如果用户没有匹配的滤波器，可以使用450 至 500nm之间的任一激发波长
10 ．染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察
11．参考图像如下：
激发波长 488nm ，散发波长 540nm（中性脂类物质呈现金黄色）
激发波长 540nm ，散发波长 590nm（中性脂类物质呈现桔红色）
12 ．本公司提供系列脂类染色试剂产品

质量标准
1 ． 本产品经鉴定性能稳定
2 ． 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告） 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组份订购信息

编号        名称                规格
G&VS80050. 1    细胞中性脂质尼罗红染色试剂盒         50 次
G&VS80050. 1A     清理液（Reagent A）         毫升
G&VS80050. 1B     固着液（Reagent B）         毫升
G&VS80050. 1C     染色液（Reagent C）            毫升
G&VS80050. 1D     稀释液（Reagent D）         毫升

试剂盒订购信息
产品编号        名称                    规格
G&VS80050.1    细胞中性脂质尼罗红染色试剂盒            50 次
G&VS80050.2. 1    特殊石蜡切片中性脂质尼罗红间接染色试剂盒    10 次
G&VS80050.2.2    特殊石蜡切片中性脂质尼罗红直接染色试剂盒    50 次
G&VS80050.3    冰冻切片中性脂质尼罗红染色试剂盒        50 次
G&VS80051.1    细胞中性脂质苏丹黑染色试剂盒            50 次
G&VS80051.2. 1    特殊石蜡切片中性脂质苏丹黑间接染色试剂盒    10 次
G&VS80051.2.2    特殊石蜡切片中性脂质苏丹黑直接染色试剂盒    50 次
G&VS80051.3    冰冻切片中性脂质苏丹黑染色试剂盒        50 次
G&VS80061.1    细胞中性脂质油红 O 染色试剂盒            50 次
G&VS80061.2. 1    特殊石蜡切片中性脂质油红 O 间接染色试剂盒    10 次
G&VS80061.2.2    特殊石蜡切片中性脂质油红 O 直接染色试剂盒    50 次
G&VS80061.3    冰冻切片中性脂质油红 O 染色试剂盒        50 次