甘油三酯（TG） 含量检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格：100T/96S

产品内容：
试剂一： 自备，取玻璃空瓶，加入 60mL 正庚烷，60mL 异丙醇，盖紧后混匀，4℃保存。 试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂六：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1瓶，临用前加 5mL 试剂一，即 1mg/mL 甘油三酯标准溶液，4℃保存。

产品说明：
TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 测 定原理： 用异丙醇抽提取 TG，KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛， 在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在 420 nm 有特征吸收峰，其颜色的深浅与 TG 含 量成正比。

自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、双蒸水、125mL 玻璃 空瓶。

操作步骤:
一、TG 的提取：
1 、 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~ 10的比例（建议称取约0. 1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g ，4℃离心10min ，取上清待测。
2 、 细胞、细菌：先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加 1mL 试剂一，超声波破碎 1min（强度 20％，超声 2s，停 1s），8000g ， 4℃离心 10min ，取上清待测。
3 、 血清（浆）等液体样品：直接测定。

二、测定操作：
1.    分光光度计/酶标仪预热 30min ，调节波长到 420 nm ，蒸馏水调零。
2.    水浴锅预热到 65℃。
        空白管    标准管    测定管
双蒸水 (µL）    40        
标准液 (µL）        40    
TG 待测液 (µL）            40
试剂一 (µL）    125    125    125
试剂二 (µL）    25    25    25
加试剂一后充分混匀，再加试剂二，剧烈振荡 30s ，静置，待分层后取上层溶液 15µL ，置于新 的 EP 管中。
3.    甘油三酯含量测定：
        空白管    标准管    测定管
上层溶液 (µL）    15    15    15
试剂三  (µL）    50    50    50
试剂四 (µL）    15    15    15
充分混匀，65℃水浴 3min
试剂五 (µL）    50    50    50
试剂六 (µL）    50    50    50
充分混匀，65℃水浴 15min
转移至微量比色皿/96 孔板测定 420nm 处吸光度，记为 A 空，A 标和 A 测。注 意：空白管和标准管只需测定一次。

三、计算公式：
1.  血清（浆）中甘油三酯含量：
TG  含量（mg/dL）=C  标准品×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空） =（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）
C  标准品：1mg/mL；100：单位换算系数，1dL= 100 mL。
2.  组织中甘油三酯含量：
(1) 按样本蛋白浓度计算
TG  含量（mg/ mg prot）= C  标准品×V×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷（Cpr×V） =（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷ Cpr
(2) 按样本鲜重计算
TG  含量（mg/ g 鲜重）=C  标准品×V×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷W =（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷ W
C 标准品：1mg/mL ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；V：加入试剂一的体积， 1mL。
3.  细胞、细菌中甘油三酯含量：
TG  含量（mg/104 cell）=C  标准品×（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷细菌或细胞密度 =（A 测－A 空）÷（A 标－A 空）÷细菌或细胞密度
C  标准品：1mg/mL；细菌或细胞密度：104 cell /mL。

注意事项：
1.   试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩，试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。
2.   加试剂二后需剧烈震荡，使待测液中甘油三酯得到充分提取。
3.   最低检出限为 100µ mol/L。