植物组织果糖（FT）含量检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
规格：100T/96S

产品内容：
提取液：液体 100mL×2 瓶，4℃保存；
试剂一：5mg/mL 标准液 1mL× 1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 25mL× 1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 6mL× 1 瓶， 4℃保存；
试剂四：粉剂 0.5g× 1 瓶，常温保存。

产品说明：
果糖是一种最为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁和 蜂蜜中，能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品生产中。
在酸性条件下果糖与间苯二酚反应，生成有色物质，在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。

操作步骤：
一、果糖提取：
称取约 0. 1g 样本，常温研碎；加入 1mL 提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；置于 80℃水浴锅中 10min（盖紧，以防止水分散失），振荡 3~5 次，冷却后，4000g ，常温离心 10min ， 取上清；加入少量（约 2mg）试剂四，80℃脱色 30min（盖紧，以防止水分散失）；再加入 1mL 提 取液，4000g ，常温离心 10min ，取上清液测定。

二、测定步骤
1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 480nm ，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂(μL）    空白管    标准管    测定管
样本            30
试剂一        30    
蒸馏水    30        
试剂二    210    210    210
试剂三    60    60    60
混匀，80℃水浴内反应 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却后取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 480nm处光吸收值,记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管，并计算△A 测定=A 测定管 -A 空白管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。

三、果糖含量计算：
1 、果糖含量（mg/mg prot）＝ C 标× △A 测定÷ △A 标准×V 样总÷（Cpr×V 样总） = 5 × △A 测定÷ △A 标准÷Cpr
2 、果糖含量（mg/g 鲜重）＝ C 标× △A 测定÷△A 标准×V 样总÷W
= 10× △A 测定÷ △A 标准÷W
C 标准管：标准管浓度，5mg/mL；V 样总：加入提取液体积，2mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本鲜重，g。
注：如果测定管的OD 值大于 0.4 ，请用提取液稀释样品。