总胆固醇（TC）含量检测试剂盒说明书微量法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格： 100T/96S

产品简介：
总胆固醇（Total Cholesterol ，TC）是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固 醇酯。
利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化 为 FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化，生成△4-胆甾烯酮和 H2O2 ；最后利用过氧化物酶催化 H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物，其在 500nm 有特征吸收峰，其颜色深浅与 TC 含量成正比。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、 EP 管、蒸馏水、异丙醇。

产品内容：
提取液：异丙醇 100mL×1 瓶， 自备，4℃保存； 工作液：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，10mg 胆固醇，4℃保存。临用前加入517μL提取液，振荡溶解，即为50μmol/mL 的胆固醇标准溶液。

操作步骤：
一、样本处理：
1.     组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心 10min ，取上清置冰上待测。
2.     细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万 细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w ，超声 2 秒，间隔 3 秒，总时间 3min）； 然后 10000g ，4℃离心 10min ，取上清置于冰上待测。
3.     血清（浆）样品：直接测定。

二、测定步骤：
1 、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm ，蒸馏水调零。
2 、 将 50μmol/mL 标准液用提取液稀释为 2.5 、1.25 、0.625 、0.3125 、0.15625 、0.078μmol/mL 的标 准溶液备用。
3 、 操作表：(在离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂)
        测定管    标准管    空白管
样品 (µL）        20    -    -
标准溶液 (μL）    -    20    -
提取液 (μL）    -    -    20
工作液 (µL）    180    180    180
充分混匀，37℃静置 15min ，反应完成后测定 500nm 处吸光值 A ，分别记为 A   测定管、A 标准管和 A 空白管，△A=A 测定管-A 空白管，△A 标准=A 标准管-A 空白管， 空白管只需测一次。

总胆固醇含量计算
一、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b， 将△A 带入方程得到 x  (μmol/mL）

二、总胆固醇含量的计算：
1.   血清（浆）中 FC 含量计算：  TC 含量 (μmol/dL）=x×100。
2.   组织中 FC 含量计算：
1.     按样本蛋白浓度计算
TC 含量 (μmol/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提取）=x÷Cpr。
2.     按样本鲜重计算
TC 含量 (μmol/g 鲜重）=x×V 提取÷W= x÷W 3.   细胞、细菌中 TC 含量计算：
TC 含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100：1dL=100mL；V 提取：加入样本的提取液体积，1mL；W ：样本质量，g；500:500 万个细胞 数量。

注意事项
当△A 大于 1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。