人心肌细胞 AC16

细胞介绍
AC16 人心肌细胞可以连续传代，并且当在无有丝分裂原的培养基中培养时可以分化。这些 细胞可用于研究心肌细胞的发育调控
细胞特性
1） 来源：心肌
2） 形态：成纤维细胞样，贴壁生长
3） 含量：>1x106     细胞数
4） 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
5)    用途：仅供科研使用。

运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度  冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细 胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接  收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破 损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在 4 或 5X 显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10× , 20×)各 2-3 张 以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在 37℃培养箱中放置 2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些 贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度 若在 60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到 原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基 6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长  密度达 70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞  需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培  养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 T25 培养瓶 1 ：2 传代

一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备 D/F12 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5% 。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：
1） 冻存细胞的复苏：：
将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 完全培养基的 离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。
然后将细胞悬液加入含 6-8ml 完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜 下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1.  弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2.    加入 0.25％（w   /   v）胰蛋白酶-0.53   mM   EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL ，T75 瓶 2- 3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在  显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶 后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后 吹匀。将细胞悬液按 1 ：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加6-8ml 按照说明书要求配置的新 的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。
3）细胞冻存:    收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
1.    细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计 数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×106~1×107 个活细胞/ml.
2.  1000rpm 离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每 1ml 冻存液 含 1×106~1×107 个活细胞/ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、 代数、日期等信息。
3.  将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同 时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防 护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2.  建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在  液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力 吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。