生物样品乙酸激酶法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
生物样品乙酸激酶法定量检测试剂是一种旨在通过乙酸激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环反应系统 中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化反应后吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样 品中乙酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种生物样品， 包括动物、人体、酵母、细菌等裂解或培养上清乙酸含量的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷， 性能稳定。

技术背景
乙酸（CH3COOH）是国际纯粹（理论）与应用化学联合会（IUPAC）建议名称，在化学命名法中的系统称 谓是乙醇酸，中文称之为醋酸，而无水纯乙酸则称为冰乙酸。乙酸是一种最简单的弱性有机羧酸和典型的 脂肪酸，普遍存在于各种食品、饮料，甚至纸业、药业和工业材料中。在啤酒和葡萄酒等酒类饮料加工中， 乙醇发酵或苹果酸/乳酸发酵过程会产生少量乙酸。作为挥发性酸度（VA）的标准指数，乙酸浓度已成为评 价葡萄酒质量的重要指标之一。在碳酸饮料、醋酸饮料和咖啡饮料中，乙酸作为添加剂，起到防腐和调节 酸度的作用。联合国食品和农业组织与世界卫生组织制定的食品添加剂通用标准（GSFA）中规定，在牛奶、 咖啡、茶、麦茶等饮料中，可以按照良好食品生产规范（GMP）的要求添加乙酸。而在果汁饮料中，乙酸 非自然存在，也不允许添加，所以如有乙酸存在，则表明果汁或水果原料已经腐败。采用有效的检测方  法是防止发生乙酸中毒事件的重要手段之一 。基于底物乙酸 ，在 ATP 存在的条件下，通过乙酸激酶 （acetate kinase）的催化，转化为乙酰磷酸（acetyl-phosphate 和二磷酸腺苷（ADP）；进而通过丙酮酸激酶 （pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二 核苷酸（ reduced nicotinamide adenine dinucleotide ；NADH ） 转化 为 氧 化 型 烟 酰胺 腺 嘌 呤 二 核苷 酸 （nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），其吸光峰值的变化（340nm），来定量分析乙酸的含量。其反 应方式为：

产品内容    
裂解液（Reagent A）        毫升
缓冲液（Reagent B）        毫升
酶促液（Reagent C）        微升
反应液（Reagent D）    微升
底物液（Reagent E）        微升
阴性液（Reagent F）        微升
产品说明书        1 份

保存方式：保存在－20℃冰箱里；底物液（Reagent E）避免光照；有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于样品制备的容器 微型台式离心机：用于样品操作
比色皿或酶标板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤
一、样品准备 （注意：参见注意事项7 和8）
选择一：培养细胞或细菌
1 ． 准备好 1 毫升待测细胞或细菌
2 ． 转移到到 1.5 毫升离心管
3 ． 放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 1000g
4 ． 小心抽去上清液
5 ． 加入 xx 微升裂解液（Reagent A）
6 ． 涡旋震荡 15 秒
7 ． 置于冰槽里孵育30 分钟
8 ． 放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 10000g
9 ． 小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管
10 ．移取 10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
11．即刻置于冰槽里备用或放进－20℃冰箱里保存
选择二：细胞或细菌培养液上清等
1 ． 移取 1 毫升细胞或细菌培养液到 1.5 毫升离心管
2 ． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM ，例如 eppendorf 5415）
3 ． 小心移取 100 微升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管
4 ． 即刻置于冰槽里备用或放进－20℃冰箱里保存
二、 测定准备
1.     开启并设定好分光光度仪（温度为25℃)：波长 340nm
2.     从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；底物液（Reagent E）避免光照
3.     缓冲液（Reagent B）室温下均衡温度
三、 背景对照测定
1 ． 移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）到新的比色皿
2 ． 加入 xx 微升酶促液（Reagent C）
3 ． 加入 xx 微升反应液（Reagent D）
4 ． 加入 xx 微升底物液（Reagent E）
5 ． 加入 xx 微升阴性液（Reagent F）
6 ． 上下倾倒数次，混匀
7 ． 在 25℃温度下孵育 10 分钟
8 ． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照
四、 样品测定
1 ． 移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）到新的比色皿
2 ． 加入 xx 微升酶促液（Reagent C）
3 ． 加入 xx 微升反应液（Reagent D）
4 ． 加入 xx 微升底物液（Reagent E）
5 ． 加入 10 微升待测样品（50 微克蛋白）（注意：样品须清澈）
6 ． 上下倾倒数次，混匀
7 ． 在 25℃温度下孵育 10 分钟
8 ． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数

五、计算样品活性

六、 酶标板测定
1 ． 在 96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品
2 ． 分别移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）到 96 孔板中的所有孔里
3 ． 分别加入 xx 微升酶促液（Reagent C）
4 ． 分别加入 xx 微升反应液（Reagent D）
5 ． 分别加入 xx 微升底物液（Reagent E）
6 ． 分别加入 10 微升阴性液（Reagent F）或待测样品到相应孔中（注意：样品须清澈）
7 ． 轻轻摇动酶标板
8 ． 在 25℃温度下孵育 10 分钟
9 ． 即刻放进酶标仪检测
10 ．活性计算

注意事项
1 ． 本产品为 20 次操作，包括背景对照
2 ． 本产品检测敏感度为 2 微摩尔/升（0. 12 毫克/升）
3 ． 操作时，须戴手套
4 ． 系统操作过程中，背景测定只需 1 次
5 ． 样品须澄清，至关重要
6 ． 乙酸是一种挥发性物质，因此样品处理时，不应该加热、干燥、暴露于空气中等，如果无法避免，可 使用氢氧化钠调整 pH ，使其转化为乙酸盐
7 ． 如果样品中存在高浓度的蛋白、脂肪酸、酚类等物质，建议进行样品预处理（去色、去脂、去蛋白、 去气体等）；本公司提供乙酸待测样品处理试剂盒－G&VS19002. 11
8 ． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
9 ． 测定值由高到低变化，表明样品乙酸阳性
10 ．反应 10 分钟后比色测定值趋于稳定；如果仍有波动，建议适当延长检测时间，直至读数稳定
11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12 ．本公司提供系列乙酸检测试剂产品

质量标准
1 ． 本产品经鉴定性能稳定
2 ． 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告） 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号                            名称                                                  规格
G&VS19003.10         生物样品乙酸激酶法定量检测试剂盒       20次
G&VS19003. 10A      裂解液（Reagent A）                           毫升
G&VS19003. 10B      缓冲液（Reagent B）                           毫升
G&VS19003. 10C      酶促液（Reagent C）                           毫升
G&VS19003. 10D      反应液（Reagent D）                           毫升
G&VS19003. 10E       底物液（Reagent E）                           毫升
G&VS19003. 10F       阴性液（Reagent F）                           毫升

试剂盒订购信息
产品编号        名称                规格
G&VS19002. 11    乙酸待测样品处理试剂盒        20 次
G&VS19003. 1    酒类乙酸激酶法定量检测试剂盒        20 次
G&VS19003.2    饮料乙酸激酶法定量检测试剂盒        20 次
G&VS19003.3    调料乙酸激酶法定量检测试剂盒        20 次
G&VS19003.4    烘赔食品乙酸激酶法定量检测试剂盒    20 次
G&VS19003.5    乳品乙酸激酶法定量检测试剂盒        20 次
G&VS19003.6    蔬菜乙酸激酶法定量检测试剂盒        20 次
G&VS19003.7    肉类乙酸激酶法定量检测试剂盒        20 次
G&VS19003.8    药品乙酸激酶法定量检测试剂盒        20 次
G&VS19003.9    饲料乙酸激酶法定量检测试剂盒        20 次
G&VS19003.10    生物样品乙酸激酶法定量检测试剂盒    20 次