本试剂盒仅供科研使用

超氧阴离子清除能力试剂盒说明书

一、产品简介：
超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，引起细胞结构和功 能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。
外源体系产生的氧自由基与还原型物质作用生成紫红色的化合物，在 570nm 处有特征吸收峰，样品对 超氧阴离子的清除能力与 570nm 的吸光值呈负相关。

二、试剂盒组分与配制:
试剂名称            规格            保存要求    备注
试剂一    液体 20mL×1 瓶      4℃保存    
试剂二    粉剂 A×5 支
               液体 B×1 支            4℃保存    临用前甩几下，使粉剂落到底部，每支加 0.1mL 液体 B 振荡或超声溶

                                                               解后，     再加 3.9mL 蒸馏水混匀使用即加样表中的试剂二 (务必加 0.1mL

                                                               液体 B 溶解后再加水) ，一周内用完。
试剂三    液体×2 支 EP 管    4℃保存    临用前离心或甩几下使试剂落入底部，每支再 分别加 1. 1mL 蒸馏水充分

                                                                  溶解，-20℃保存。
试剂四      粉剂×1 支          4℃保存     临用前离心或甩几下使试剂落入底部，再加 3.5mL 蒸馏水充分溶解，

三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、研钵、低温离心机。

四、超氧阴离子清除能力的测定：
1 、样本制备：
① 组织样本：称取 0. 1g 样本 (若是干样可取 0.02-0.05g) ，加入 1mL 的 80%乙醇 (自 备)进行匀浆，匀浆后转入 2mL 离心管中；于 50℃，200-300W 条件下超声提取 30min
(间隔 5min 振荡混匀一次) 。若有损耗需用 80%乙醇定容至 1mL ，12000rpm 室温 离心 10min ，取上清待测。
② 液体：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2 、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 570nm ，所有试剂解冻至室温 (25℃)。
② 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称(μL)    测定管    对照管    空白管 (仅做一次)
样本                   10          10    
试剂一               75           95           85
试剂二                80           80          80
试剂三                20           20
试剂四               15           15          15
混匀，于 37℃反应 10min ，于 570nm 处读取各管吸光值 A。
【注】：不同样本清除能力不一，可先选取 2 个样本做检测，若 A 测定-A 对照值大于 A 空白；可增加样本量 (如由 10μL 增至 40μL ，则试剂一相应减少) 。若 A 测定-A 对照接近零，需对样本进行稀 释 (用 80%乙醇稀释) 后再检测。

五、结果计算：
超氧阴离子清除率 I%=[1-(A 测定-A 对照)÷A 空白]×100%