CAT#:JW-220956-50 常温运输和保存

PAGE 凝胶蛋白回收试剂盒（过柱法）PAGE Protein Recovery Kit

产品及特点
SDS-PAGE 电泳不仅可用于检测蛋白质的相对分子质量 ，而且也是分离纯化蛋白质的重要工具之一。随着蛋白质技术的微量化，可以从 PAGE 凝胶中 回收蛋白质以用于制备抗体、 用于免疫印迹实验、 用于氨基酸组分分析或末端 序列测定等 。本产品就是专门针对此用途开发的 PAGE 凝胶蛋白回收试剂盒， 它具有下列特点：
1.   简单 ，不需要购买复杂而昂贵的仪器设备（如电洗脱仪）。
2.   适用于变性胶（ SDS-PAGE）、 非变性胶（如 Blue PAGE）和其他任何PAGE 凝胶。
3.   蛋白的回收率一般在 50-90%之间（跟蛋白质大小 ，洗脱时间相关）。
4.   回收的蛋白可用于后续多种实验，包括 2-D 电泳、质谱测序、抗体制备等。
5.   本产品足够 50 次微量蛋白纯化。
6.   本产品只能用于科研。
规格及成分                              本产品使用小扁盒包装
成份                                                           编号        规格       包装
过柱法 PAGE 凝胶蛋白回收溶液 A       220956a     10 mL    10 mL 本色瓶
离心吸附柱                                            220144       50 个      塑料袋
使用手册                                                220956sc    1 份       1 份

运输及保存：常温运输和保存 ，有效期一年。
自备试剂：无

使用方法  
1.  按常规方法进行变性 SDS-PAGE、尿素-PAGE ，Tricine-SDS-PAGE 电泳 ， 或非变性蛋白电泳 ，如 Bule PAGE 。 由于 PAGE 凝胶固定和染色后， 蛋白回收效果很差 ，所以建议把蛋白样品同时上样到多个孔中并电泳。
2.   电泳结束后 ，在对 PAGE 凝胶进行固定和染色时 ，切下其中一个样孔所对 应的胶条进行固定和染色 ，其余的不固定不染色。
3.  将出现蛋白条带后的胶条放回到在整个 PAGE 胶中此胶条切除前的位置 ， 通过胶条上的蛋白条带来找到在未染色胶上该蛋白预计出现的区域 ，并切 下此区域的 PAGE 凝胶（含未固定和为染色的目的蛋白）进行回收。
4.  去除含目的蛋白的胶条的多余凝胶 ，否则它们会影响蛋白回收效率。
5.  将修整后的 PAGE 胶条转移到一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，放-80℃过夜。
6.  同时将一个非常干净的研钵和研磨杵放-20℃过夜。
7.  次日 ，将凝胶倒入用研钵中 ， 用研磨杵研磨成粉。
8.  将凝胶粉转移到一个吸附柱中。
9.  加入 100 μL 过柱法 PAGE 凝胶蛋白回收试剂溶液 A ，放置 10 分钟 。期间，凝胶将膨胀，继续补加，直到凝胶不再膨胀并且凝胶上层覆盖 1-2 mm 厚的液体。
10. 室温 12,000×g 离心 3 分钟 ，收集穿透液 ，并转移到新的离心管中 ，标注 为穿透液 1。
11. 再加入过柱法 PAGE 凝胶蛋白回收试剂溶液 A，使得凝胶上层覆盖 1-2 mm 厚的液体。
12. 室温 12,000×g 离心 3 分钟 ，收集穿透液 ，并转移到新的离心管中 ，标注 为穿透液 2。
13. 测定穿透液中的蛋白浓度或长度，可以直接进行后续实验，也可以放-20℃ 长期保存。
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