CAT#: 220148-250
常温运输， 4 ℃保存    

动物 RNA 提取液（Trizol）

产品及特点    
本产品是跟 TRIzol 一样的、基于异硫氰酸胍/酚/氯仿提取 RNA 原理 开发的快速总 RNA 提取试剂 ，可用于从各种动物组织（包括白细胞）和部 分植物材料中快速提取总 RNA 。它有下列特点:
1.   操作简单快速 ，只要 10 分钟左右 ，可以全在室温下进行。
2.   RNA 质量高，OD260/OD280 一般在 1.9 左右。一般不含用 RT-PCR可以检测到的基因组 DNA 污染。
3.   适用于大部分实验材料 ，如培养细胞、各种动物材料和少数植物材料。
4.   性价比高于进口 TRIzol 和 TRI Reagent 等同类产品。
5.   本产品只能用于科研。
规格及成分    本产品使用立式盒包装
成 份        编 号    规 格    包装材料    
动物 RNA 提取液    220148a    250 mL    250mL 棕色玻璃瓶    
使用手册        220148sc    1 份    无    

运输及保存：常温运输 ， 4 ℃保存 ，有效期一年。
自备试剂：氯仿、 异丙醇、 75%乙醇、 RNase-free 水。

使用方法    
注意：下面的操作步骤是用 1 mL 本产品进行的微量提取的，细胞使用量一  定要准确 ，不能超过下述用量 ，否则将超出本产品的裂解能力 ，RNA 产量  将急剧降低 。如果样品量大 ，请按比例增加各成份的用量 。RNA 工作环境  最好用高效无毒的 RNase污染清除剂彻底处理。
1.   对贴壁细胞（ 10 平方厘米）：吸尽培养液，加入 1 mL 的本产品用枪充 分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移至干净的 1.5 mL 塑料离 心管中 ，进入第 6 步。
2.   对悬浮细胞（五百万至一千万个）：离心收集细胞，吸尽液体，加入 1 mL 本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的1.5 mL 塑料离心管中 ，进入第 6 步。
3.   对新鲜组织（ 50-100 mg）：将新鲜组织剪切成小块 ，放入 10 mL 或15 mL 塑料离心管中 ，加入 1 mL 的本产品， 用 Polytron 剪切式匀浆 器冰上匀浆 30 秒左右 ，将匀浆液转移至新的 1.5 mL 塑料离心管中， 进入第 6 步 。注意：对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细 胞中含大量正在复制的 DNA），使用量不要超过 30-50 mg，否则十分 容易产生 DNA 污染 。对 10 mg 以下的组织 ，最好加入本公司的微量RNA 助沉剂。
4.   对非冻型 RNA 保存液保存的组织（ 50-100 mg）： 先用纸吸去 RNA 保存液后再剪切成小块 ，其余操作同第 3 步 。RNA 保存液处理后的组 织韧性很强 ，匀浆时间需要适当延长。
5.   对液氮中保存的组织（ 50-100 mg）：在研钵中研磨成粉 ，加入 1 mL 本产品，用枪充分吹打确保细胞全部裂解，然后将裂解液转移到干净的1.5 mL 塑料离心管中 ，进入第 6 步。
6.   在装有裂解物/匀浆物的 1.5 mL 塑料离心管中加入 0.2 mL 自备氯仿， 振荡器上充分振荡混均 30 秒 。注意 ：一定要把官底的溶液震荡起来，否则只是液面的振动。
7.    13000-15000 g 室温离心 3 分钟。
8.   将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中 。下  层有机相（蓝色）和中间层含有 DNA 和蛋白质 ，避免触及 ，否则将产  生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下 50-100uL 上清液不取。
9.   对脂类丰富的组织（如脂肪组织和脑组织），需再重复氯仿抽提一到两 次以让氯仿充分去除脂类分子。
10. 在上清液中加入等体积的异丙醇 ，振荡器上振荡 30 秒混匀。
11.  13000-15000 g 室温离心 5 分钟 ，离心底的侧面将形成 RNA 沉淀。如果组织使用量低于 10 mg 或需要提高 RNA 回收率 ，可以将离心时 间延长到 20 或 30 分钟。
12. 小心吸弃上清液 ，注意不要吸弃 RNA 沉淀。
13. 在含 RNA 沉淀的离心管中加入 1mL 75%乙醇 ，振荡混匀 30 秒。
14.  13000-15000 g 室温离心 1 分钟。
15. 小心吸弃上清液 ，注意不要吸弃 RNA 沉淀。
16. 重复第 13-15 的洗涤步骤一次（也可以省略）。
17. 短暂快速离心 ，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约 50 uL) 。注意不要吸弃  RNA 沉淀 。此步十分重要 ，否则残留的乙醇会影响 RNA 的后续使用。
18. 室温放 1-2 分钟后立即加入 50-100 uL RNase-free水使 RNA 沉淀溶 解 。千万不要用真空离心法使 RNA 沉淀过于干燥 ，否则 RNA 将变得 十分难溶 。RNA 样品可以立即使用或存放于-80℃待用。

附件 ：RNA 的浓度和质量检测
19. RNA 的浓度可以用 pH 在 7.5-8.2 的 TE 缓冲液将 5-10 μL RNA 稀释 10-20 倍后在 OD260 和 OD260 测光吸收 ，通过光吸收可以得出  RNA 浓度（ 1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量 （浓度×体积)和产率(RNA 产量/组织用量) 。RNA 的产率随组织的营 养状态和组织的种类不同而不同 ，一般来说 ，代谢旺盛的组织(如肝脏 和肾脏)RNA 的产率高，代谢不旺盛的组织(如肌肉和脂肪组织)RNA 的 产率低 。肌肉、胎盘和脑组织一般是 1-2 μg RNA/mg 组织 ， 肝、胰 和 肾 组织 一 般 是 5-10 μg RNA/mg 组 织 ， 培 养 细胞 一 般 是 5-15 μg/ 10E6 细胞。
20. RNA 的纯度通过 OD260/OD280 来确定 ，一般在 1.8-2. 1 之间即算 合格 。但即使低于此范围 ，一般也不会影响 RT-PCR 等反应 。如果有 蛋白质污染 ，可以通过酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除 ，如果有多 糖污染可以用本公司的 RNA 多糖清除剂去除。
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