永生化大鼠骨髓间充质干细胞说明书

产品信息
细胞名称：永生化大鼠骨髓间充质干细胞
产品货号：JW-Y058
产品规格：5×105cells/T25 培养瓶
组织来源：原代大鼠骨髓间充质干细胞
生长特性：贴壁生长
细胞形态：成纤维细胞样
培养体系：永生化大鼠骨髓间充质干细胞专用培养基
传代比例：1:2
消化时间：2-3min
冻存条件：无血清细胞冻存液（科研级）
培养环境：气相：空气，95% ；二氧化碳，5% 。温度：37℃。
注意事项：收集细胞瓶中完全培养基做过渡对比培养

细胞介绍
大鼠骨髓间充质干细胞分离自骨髓组织；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼 内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。 血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能 制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如肱 骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能 产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大， 脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨 髓基质系统内存在的骨髓间充质干细胞是一种除造血干细胞以外的、具有高度自我更新能力 和多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化， 因此可 以作为组 织工程 中的种子细胞 。 在骨髓 中 ， BMSC   占骨髓有核细胞 总数 的 0.001%-0.1% ，含量极低。骨髓间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中，受 贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基 pH  值等条件的影响。
本公司供应的 SV40T  大鼠骨髓间充质干细胞采用冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁 法结合培养基筛选制备而来，细胞总量约为 5×10^5cells/瓶；细胞经 CD34 、CD90  免疫 荧光鉴定，纯度可达 90%以上，且不含有 HIV-1 、HBV 、HCV 、支原体、细菌、酵母和真菌等。

常温细胞收货后处理方法
1.    收到细胞后，首先观察培养瓶是否完好，若发现培养瓶有破裂，培养基外溢、浑浊等现 象，请及时拍照并与我们联系。
2.    用 75%酒精对培养瓶表面进行消毒处理，将培养瓶置于细胞培养箱中静置培养 2~4 h， 以恢复细胞状态。
3.    静置完成后，取出培养瓶，显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保 存（40× , 100× ,200×各一张）前三天照片为重要售后依据。如发现细胞异常请及时与我 们联系，如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。
4.    若细胞密度超过 80% ，则可以根据提供的细胞培养步骤进行传代；若细胞密度未达到 80% ，收集瓶中完全培养基，留 6mL 培养基，放入细胞培养箱中继续培养。

细胞培养步骤
1.   复苏细胞：从液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热 37℃。
1)    将查找到的冻存细胞在 37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2)    将冻存管中的细胞移至含 5ml  完全培养基的离心管中，1000rpm  离心 5min；
3)    弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀，接种于 T25 培养瓶中（或 6cm 皿中）， 培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。
2.    细胞传代：如果细胞密度达 80%-90% ，即可进行传代培养。
1)    弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次；
2)    加 1-2mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱 中消化 2-3min ，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落， 迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止 消化；
3)    轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000rpm 离心 5-8min，弃去上清液， 补加 1-2mL 完全培养基后吹匀；
4)    按 5-6mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中。
（即 1 个 T25 传代接种至 2~3 个 T25 或者 2~3 个直径为 6cm 的培养皿）
3.    细胞冻存：细胞收集参照传代步骤 1~2 ，按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃ 冰箱过夜，后续可转入液氮罐中长期保存。

注意：在技术部标准操作流程下，永生化大鼠骨髓间充质干细胞可传20代左右；建议 您收到细胞后尽快进行相关实验。

关于细胞株售后服务
1.    培养基于4℃条件下可保存3-6个月；
2.    在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作；
3.    细胞从收货之日起（若冻存细胞，复苏3日内，收到请尽快复苏），出现任何问题， 请提供相应的图片，免费重发；
4.    若重发后，细胞除下述四种情况外，再免费重发，其他情况不予免费重发。若仍出现问 题，建议客户把细胞相关实验委托我方完成，不再收取细胞共享费用。
细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液漏 液等，重发；
细胞污染问题，给我们提出真实的实验图片和结果，重发 ；
冻存的细胞复苏后或常温细胞静置后，绝大多数细胞未存活（提 供清晰的细胞 照片），重发；
存活细胞，静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
5.    人源细胞（STR）或大小鼠细胞系（种属鉴定）鉴定结果存在争议，可以 在收到细 胞3个月内提供真实有效的检测证明，本公司承诺无条件退还细 胞款项以及产生鉴 定费用。
6.    客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以联系技术售后，我们随时 给予解答。
7.    售后需要提供资料：收到时整体培养瓶拍照、静置后细胞照片、3日内细 胞照片等； 图片尽量清晰。
温馨提示：
  客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项，确保细胞的培养 条件一致；
  台盼蓝染色法鉴定细胞活力；
  细胞培养瓶中的培养液约为70mL  ，收到细胞后，把培养方瓶里 的培养基收集 放置于4℃备用（传代后1瓶用发货瓶里面的培养液、一瓶用户自备的，进行对 比培养，使细胞逐渐适应培养条件， 以免因不适应而造成生长状态不佳。）

由于使用所用试剂、操作环境、操作手法不同， 以上仅供各实验室参考！