CAT#:220168- 1000
常温运输和保存
改良 Lowry 法蛋白定量试剂盒
Modified Lowry Protein Assay Kit
产品及特点
Folin酚(福林酚) 试剂(磷钼酸和磷钨酸混合物)跟蛋白质中含酚氨基酸 (色氨酸和酪氨酸) 发生颜色反应 ，可用于测定蛋白质浓度 ，但灵敏度较低 。Lowry 在此基础上加入 Biuret (双缩脲) 反应步骤 ，即先在碱性条件下使蛋白 质和 Cu+形成复合物，再使其与 Folin 酚试剂发生显色反应，产物在 750nm 检 测。Lowry 法使不含酚的蛋白质也能被检测出来，灵敏度是单独使用 Folin 酚的 10 倍左右 ，是双缩脲反应的 200 倍 ，因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。Lowry 法检测原理图请咨询客服。
传统 Lowry 法受到很多常用的试剂 (如 DTT、糖、甘油、Triton 等) 干扰， 步骤繁琐 。本公司对 Lowry 法进行改良 ，具有下列特点：
1. 即开即用 ，不需要单独购买每个成分再配制。
2. 能抵抗部分干扰物 (如一定浓度 SDS 或其他去污剂) 的干扰。
3. 检测线性范围广 ，在 2- 100 g ，检测上限比经典 Lowry 法高 30%-40%。
4. 本产品只能用于科研。
规格及成分 本产品采用大扁盒包装
成分 编号 规格 包装
改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A1 220168a 1 208 mL 250 mL 本色瓶
改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A2 220168a2 16 mL 30 mL 本色瓶
改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A3 220168a3 16 mL 30 mL 本色瓶
改良 Lowry 法蛋白定量溶液 B 220168b 80 mL 125 mL 本色瓶
改良 Lowry 法蛋白定量溶液 C 220168c 80 mL 125 mL 本色瓶
福林酚 1 1-S221147 10 mL 10 mL 棕色瓶
BSA 标准品 ，2 mg/mL 220565 1 mL 1.5 mL 本色管
使用手册 220168sc 1 份 无
运输及保存：常温运输和保存 ，但 BSA 标准品需要-20℃保存 ，有效期 12 个月。
自备试剂：去离子水 ，蛋白样品 ，样品缓冲液。
使用方法 一、工作液的制备
1. 制备溶液 A：将 16 mL 改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A2 和 16 mL 改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A3 加入到装改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A1 的塑料瓶中， 混合均匀得到 240 mL 改良 Lowry 法蛋白定量溶液溶液 A。
2. 制备改良 Lowry 法蛋白定量工作液 ：将改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A、改 良 Lowry 法蛋白定量溶液 B 和改良 Lowry 法蛋白定量溶液 C 按 3： 1： 1 的体积比混合得到改良 Lowry 法蛋白定量工作液 。 此工作液可以室温放置 2-3 周 ， 所以最好用多少配多少 。如果发现改良 Lowry 法蛋白定量溶液 B 或改良 Lowry 法蛋白定量溶液 C 有沉淀 ，需 37℃溶解并摇匀后再使用。
3. 制备福林酚工作液：在装有 10 mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入 90mL 去离 子水 ，摇晃混匀待用 。 此工作液在避光条件下可以放置 6 个月。
二、试管法
4. 先用去离子水将 BSA 标准品 ，2 mg/mL 稀释到 50 g/mL ，然后在标记 的试管中加入下列成分 (单位： L) 。注意 ：每个样品最好做三个稀释度，
每个稀释度最好设置三次重复 ， 阴性对照和标准品也最好做三次重复。
标准品 (每个做三次重复 ， 此处只列出一个)
编号 BSA 标准，50 g/mL 水 总体积
阴性对照 0 0 200
1 0 200 200
2 25 175 200
3 50 150 200
4 100 100 200
5 150 50 200
6 200 0 200
样品 (以 1 个样品、 3 个稀释度为例，每个稀释度三个重复 ， 此处只列出一个)
编号 样品 总体积
1 200 (稀释度 1) 200
阴性对照 1 200 (用稀释度 1 稀释的溶解蛋白样 品的缓冲液) 200
2 200 (稀释度 2) 200
阴性对照 2 200 (用稀释度 2 稀释的溶解蛋白样品的缓冲液) 200
3 200 (稀释度 3) 200
阴性对照 3 200 (用稀释度 3 稀释的溶解蛋白样品的缓冲液) 200
5. 每管中加入 200 L 改良 Lowry 法蛋白定量工作液 ，振荡混匀后室温反应10 分钟。
6. 每管中加入 100 L 福林酚工作液 ，振荡混匀后室温反应 30 分钟。
7. 用容量为 0.5 mL 、 光径为 1 cm 的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯测定 750nm 的光吸收。测定时，先空白 (即阴性对照) 后样品，测定样品和 BSA 标准品时 ，先低浓度后高浓度 。测定未知样品前需要将杯子清洗干净，必要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。
8. 根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线，然后根据未知样品的光吸收从标准曲线中查得其对应的浓度。
三、96 微孔板法
9. 同上 ，只是反应用 96 微孔板设置 ， 用酶标测试仪 750 nm 测定光吸收。
四、样品中干扰物质的去除
10. 如果样品中有干扰 Lowry 法蛋白定量的物质 ，可用自备试剂按下法去除 ： 用水将样品调到体积为 200 L,加入 20 L 的 0. 15%去氧胆酸钠 ，混匀 ， 室温放置 10 分钟 。加入 20 L 的 72%的 TCA ，室温放置 5 分钟 。3000 g 离心 15 分钟 ，小心去除上清 。 用 200 L 水溶解蛋白沉淀后以用于 Lowry法测定。
关联产品 总蛋白含量测定试剂盒(双缩脲法)
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