CAT#:JW-220153
常温运输及保存

细菌DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。本产品特点如下：
1.操作简单，整个过程不到20分钟。
2.产率一般在5-20 μg/mL过液培养的饱和菌液（108-109个细胞）。
3.OD260/280一般在1.8以上，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4.DNA片段长度一般在40-50 kb左右。
5.每次提取可以处理0.1-1.5 mL的细菌，也可以使用菌落。
6.价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
7.安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。
8.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用大扁盒包装
成 份                                               编号       规格            包装材料
溶菌酶干粉                                  210808        600 mg    1.5 mL白色管
细菌DNA纯化溶液A                     220153a    15 mL       15 mL本色瓶
细菌DNA纯化溶液B                     220153b    7.5 mL       10 mL本色瓶
细菌DNA纯化溶液C                      220153c    30 mL        30 mL本色瓶
离心吸附柱                                    220144       50套        塑料袋
通用洗柱液                                    220143       50 mL       60mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125    10 mL        10mL本色瓶
使用手册                                        220153sc    1份        1份

运输及保存
常温运输及保存（溶菌酶干粉可以常温运输，但长期保存需要放4℃或-20℃），有效期一年。

自备试剂
氯仿、自备无菌水。

使用方法
注意：细菌DNA纯化溶液A和细菌DNA纯化溶液B容易产生沉淀，细菌DNA纯化溶液B十分粘稠，均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。
一: 对革氏阴性细菌样品，不需用溶菌酶
1.将0.1-1.5 mL过夜培养的菌液转移到1.5 mL塑料离心管中，12,000 rpm室温离心1分钟沉淀细菌，弃上清。
2.加入300 μL预热的溶细菌DNA纯化液A到细菌沉淀中，充分吹打均匀。
3.再加入150 μL 预热的细菌DNA纯化溶液B到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B比较粘稠，可以采取称量方法取用，150 μL 约等于150-160 mg。也可以将1 mL枪头剪去一截再吸取。
4.65℃放置3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。
5.加入200 μL自备氯仿，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。
6.12,000 rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5 mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。
7.加入1.5倍体积(约0. 7 mL)的细菌DNA纯化溶液C，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
8.12,000 rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
9.将0.5 mL通用洗柱液加入离心柱中，12,000 rpm室温离心1分钟，弃穿透液。
10.重复上步操作一次。
11.空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5 mL离心管中。
12.加50-100 μL DNA洗脱液（基因组纯化专用），室温放置3-5分钟。
13.12,000 rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。
14.由于本产品使用的离心吸附柱吸附DNA的能力较强，可以重复上步操作一次以便得到更多的DNA。
15.直接取5-10 μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。

二: 对革氏阳性细菌样品，需用溶菌酶
1.将0.1-1.5 mL过夜培养的革氏阳性细菌12,000 rpm室温离心1分钟后, 重悬于0.6 mL溶菌液中（溶菌液配制:30 mL无菌水+600 mg溶菌酶，配制后最好分装成小管并放-20℃长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀5-10次后放37℃保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，需要自己根据不同的细菌摸索)。
2.12,000 rpm室温离心10分钟，小心弃上清。
3.后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。

三: 其他注意事项
1.可以直接使用细菌菌落提取DNA，操作时直接将细菌菌落挑入到细菌DNA纯化溶液A中，后续操作同上。
2.从单个菌落中提取到的DNA较少，所以只用30 μL DNA洗脱液（基因组纯化专用）洗脱。
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