CAT#:JW-7-230319
低温运输，-20℃保存

PME果胶甲酯酶活性测定试剂盒（410/510 nm荧光法）
使用手册V1.0

产品及特点
果胶甲酯酶（Pectin Methylesterase，PME，EC3.1.1.11）又称为果胶酯酶（Pectinesterase），分子量为34－37kDa，广泛存在于所有植物组织以及植物病源菌（真菌和细菌）中。它能催化果胶的甲氧酯水解产生果胶酸和甲醇，而果胶（Pectin）又是植物细胞壁的主要结构成分，占35％的植物多糖总量。果胶是同型聚糖半乳糖醛酸（Homogalacturonan；HGA）和鼠李聚糖半乳糖醛酸（Rhamnogalacturonan；RG）的复合物，其中的80％的HGA被甲基酯化。果胶甲酯酶通过使果胶去酯化，产生水溶性的果胶酸和甲醇而参与植物细胞壁的代谢，进而参与植物发育、形态形成、成熟、细胞壁延展和稳固、水果软化脱落和衰老、防止感染等生理活动。在工业上，果胶甲酯酶常用于果菜汁等的澄清、液化、和水果软化和成熟。因此测定果胶甲酯酶的活性具有重要的意义。
本试剂盒的原理是以果胶为底物，在待测果胶甲酯酶的催化下，产生果胶酸和甲醇。甲醇在醇氧化酶的作用下变成甲醛，甲醛跟荧光底物反应产生荧光（激发波长410 nm，发射波长510 nm）。用荧光分光光度仪下测定荧光物质的量即可计算出待测样品中果胶甲酯酶的相对活性。本产品基于上述原理开发，它的特点如下：
1.即开即用，用户不用单独准备各种试剂。
2.操作简单，加入样品到1mL比色皿中之后直接进行3分钟即可。
3.适用于植物、真菌和细菌的PME样品。
4.跟大多数蛋白提取试剂盒成分兼容。如甘油、EDTA、Triton X-100等。
5.本试剂盒足够100次测定，每次可以测定0.2mL PME初提液。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用塑料袋包装
成份                                     编号         规格             包装
PME活性测定反应液     7-230319a     35 mL      60 mL本色瓶
果胶溶液                       7-230319b      37 mL      60 mL本色瓶
醇氧化酶溶液                7-230319c      150 mL    0.5 mL红盖管
PME荧光底物                7-230319d     1.5 mL    1.5 mL棕色管
使用手册                       7-230319sc    1份                 无

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备物品
超纯水、荧光分光光度计，1 mL比色皿、待测样本和样本缓冲液
使用方法
1.准备工作
将醇氧化酶溶液以外的成分放常温化冻，可以适当37℃水浴。摇晃混匀后放常温待用。
2.在跟荧光分光光度计兼容的1 mL比色皿中加入如下成分：
成份                               阴性对照1个        样品N个
PME活性测定反应液        345 mL             各345 mL
果胶溶液                           366 mL             各366 mL
PME荧光底物                     15 mL             各15 mL
醇氧化酶溶液                      1.5 mL            各1.5 mL
待测PME样品                      不加                各15 mL
PME样本缓冲液                 15 mL                 不加
超纯水                               157.5 mL          各157.5 mL
总体积                                 900 mL              900 mL
3.盖上比色皿的盖子后快速颠倒混匀，然后放入荧光分光光度计，410 nm激发，检测510 nm发射光。如果荧光分光光度计带温控，需要将反应温度设置在25℃。
4.实时测定510 nm的吸光度变化，共测3分钟。
5.从样本的荧光读数中扣除阴性对照的读数，然后以时间为横轴，以荧光读数为纵轴，根据1-3分钟之间的数据（速度的线性区）计算荧光增幅/时间的比值，在根据单位时间比值的增加定义活力单位（目前并没有统一的基于荧光检测的PME活性单位的定义，故此定义只适用于本产品）。如果只是相对比较，则可以不需要换算成活性单位，直接比较相同条件下荧光值的增幅即可。
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