货号：GV-W-C403 规格：100管/96样
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase，AGP）活性测定试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理
AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存;
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入6.4mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍 4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入4.8mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
粗酶液制备
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置30℃保温10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂（如果一次性测定样本较多，可以将试剂一和试剂二按比例配成混合液 1）
| 试剂名称（μL） | 测定管 |
| 试剂一 | 40 |
| 试剂二 | 64 |
| 样本 | 8 |
| 混匀，30℃保温15min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却后加入 下列试剂（如果一次性测定样本较多，可以将试剂一和试剂三按比例配成混合液 2） | |
| 试剂一 | 120 |
| 试剂三 | 48 |
混匀后立即转移 200μL至微量石英比色皿或 96 孔板中， 340nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算 ΔA=A2-A1。
AGP 活性计算
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T
=2813×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W× V 样÷V 样总）÷T
=2813×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2.8×10 -4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.008 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T
=5626×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T
=5626×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2.8×10 -4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.008 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
