抗坏血酸含量测定试剂盒说明书

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

货号：YX-W-A300

规格：100T/96S

产品内容：

提取液：液体120ml× 1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体6ml× 1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体5ml× 1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体6ml× 1 瓶，4℃保存；

标准品：粉剂10mg×1 瓶 (避光) ，4℃保存。  (称取1mg加入10ml提取液，即为100μg/ml标准

品)

试验中所需的仪器和试剂：

研钵、冰、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

产品说明：

AsA 又称维生素c。AsA 是辅酶、 自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的 底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用， 也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

抗坏血酸具有较强还原能力将Fe3+还原成Fe2+，邻二氮菲与Fe2+会形成红色螯合物，在534nm处具 有强的吸收法，且吸光值与反应液中抗坏血酸含量呈正比。

操作步骤：

一、样品的前处理：

(1)  组织：按照组织质量 (g) ：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例 (建议称取约 0.1g 组织， 加入1ml提取液) 进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

(2)  细菌、真菌：按照细胞数量 (10个) ：提取液体积 (ul) 为500~1000：1 的比例 (建议500 万细胞加入1ml提取液) ，冰浴超声波破碎细胞 (功率 300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min) ；8000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。

(3)  血清等液体：按照样本体积 (g) ：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例 (建议称取约 0.1ml 样本，加入1ml提取液) 进行混匀。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

二、测定操作表：

1.     分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 534nm ，提取液调零。

2.     测定前将所有试剂 37℃ (哺乳动物) 或 25℃ (其它物种) 水浴 5min 以上。

3.     标准曲线的绘制及样本测定 (按顺序加入下列试剂)

充分混匀，室温静置 15min 后，534nm 处测定各管吸光值。如底部有沉淀，离心后再读数

三、抗坏血酸含量计算

根据标准曲线，将样品△A 带入公式中 (x ) ，计算出样品浓度 y  (μg/mL) 。 1.按蛋白浓度计算

抗坏血酸 (μg / mg prot) =y×V  样÷  (V  样×Cpr)

2.按样本鲜重计算

抗坏血酸 (μg/g 鲜重) = y×V  样÷(V  样÷V  样总×W)

3.按细胞数量计算

抗坏血酸 (μg / 106cell) = y×V  样÷(V  样÷V  样总×细胞数量)

4.按体积计算

抗坏血酸 (μg /ml) = 10y

V 样总：上清液总体积，mL；V 样：加入反应体系中上清液体积；W：样品质量，g  ；Cpr：上 清液蛋白质浓度，mg/mL；细胞数量：以 106 为单位计量；T：样本稀释倍数。

注意事项：

1 、样品处理需匀浆完全，抗坏血酸易分解，需避光保存

2 、标准品：现配现用。

3 、若不确定样品中 抗坏血酸 含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。

4 、因为提取液中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。