谷氨酰胺合成酶（GS）活性检测试剂盒说明书                   

微量法

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

货号：YX-W-A807 规格：100T/48S

产品内容：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 10mL×1 瓶，-20℃保存。 试剂二：液体 10mL×1 瓶，-20℃保存。

试剂三：粉剂×2 瓶，-20℃保存。用时每瓶加入 5mL 双蒸水充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃ 分装保存。

试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

产品说明：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸 合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运 输形式。

GS 在 ATP 和 Mg2+存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨 酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在 540nm 处有最大吸收峰。

所需的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研 钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本测定的准备

1 、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104    个）：提 取液体积（mL）为500~ 1000：1  的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL  提取液），超声波破碎细 菌或细胞（冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30  次）；8000g 4℃离心10min ，取上 清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0. 1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。

2 、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤

1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm ，蒸馏水调零。

2 、在 EP 管中加入下列试剂：

混匀，静置 10min 后，5000g ，常温离心 10min，取 200µL 上清液至微量玻璃比色皿或 96 孔 板中，测定 540nm 处的吸光值 A 。△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

三、GS 活力单位的计算

1. 用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

（1） 按血清（浆）体积计算

单位定义：每 mL  血清（浆）在每 mL 反应体系中每 min 使 540 下吸光值变化 0.01 定义为一 个酶活力单位。

GS（U/mL）=∆A×V 反总÷V 样÷0.01÷T = 19×∆A

（2） 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.01 定义为一个酶活 力单位。

GS（U/mg prot）= ∆A×V 反总÷（Cpr×V 样）÷0.01÷T = 19×∆A÷Cpr

（3） 按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织在反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单 位。

GS（U/g 鲜重）= ∆A×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷0.01÷T = 19×∆A÷W

（4） 按细菌或细胞数量计算

单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个 酶活力单位。

GS（U/104 cell）= ∆A×V反总÷（500×V样÷V样总）÷0.01÷T =0.038×∆A

V 反总：反应体系总体积，400µL=0.4mL；V 样：加入样本体积，70µL=0.07mL；V 样总：加 入提取液体积，1 mL；T ：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g； 500：细菌或细胞总数，500 万。

2. 用 96 孔板测定的计算公式如下

（1） 按血清（浆）体积计算

单位定义：每 mL  血清（浆）在每 mL 反应体系中每 min 使 540 下吸光值变化 0.005 定义为一 个酶活力单位。

GS（U/mL）=∆A×V 反总÷V 样÷0.005÷T =38×∆A

（2） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.005 定义为一个酶 活力单位。