丙酮酸（PA）含量检测试剂盒说明书（微量法）

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

货号：JW-W-B204 规格：100T/96S

产品内容：

提取液：液体100mL×1  瓶，4℃保存；

试剂一：液体5mL×1  瓶， 4℃保存；

试剂二：液体25mL×1  瓶， 4℃保存。

丙酮酸钠标准液，1mg/mL：液体1mL×1瓶，4℃保存

产品说明：

丙酮酸通过乙酰CoA  连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。 丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰、 蒸馏水。

操作步骤：

一、丙酮酸提取：

1 、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104  个）：提 取液体积（mL）为500~ 1000：1  的比例（建议500  万细菌或细胞加入1mL  提取液），超声波破 碎（冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30  次），静置30min ，8000g ，常温离心 10min ，取上清待测。

2 、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0. 1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min ，8000g ，常温离心10min ，取上清待测。

3 、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议取0. 1mL 血清（浆）加入1mL  提取液），进行冰浴匀浆，静置30min ，8000g ，常温离心10min ，取上清 待测。

4 、标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至100 、50 、25 、12.5 、6.25 、3.125 、1.5625 、0μg/mL。

二、测定步骤：

1 、分光光度计/酶标仪预热30min  以上，调节波长至520nm ，蒸馏水调零。

2 、在微量玻璃比色皿或 96 孔板中加入 75μL 标准液或样本和 25μL 试剂一，混匀，静置 2min ，加 入 125μL 试剂二，混匀，于 520nm 波长处测定吸光值 A。

三、丙酮酸含量计算：

1 、根据标准品浓度和测定值建立标准曲线；y为丙酮酸钠含量 (μg/mL），x为吸光值。

2 、按照血清（浆）体积计算