超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：GV-W-A500
规格：200T/96S
产品内容：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 10 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存，用时加 27mL 双蒸水配制成悬浊液，使用前充分摇匀； 试剂三：液体 200μL×1 支，4℃保存；临用前加入200μL蒸馏水。
试剂四：液体 8mL×1 瓶，4℃保存。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏
水
产品说明：
SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜， 后者在 560nm 处有吸收；SOD 可清除 O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。优选生物创造性的设置SOD对照管，消除了样本颜色对实验的干扰。
操作步骤：
一、样品的前处理：
(1) 细菌、细胞或组织样品的制备：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎（功率 20%或 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。8000g 4℃离心 10 分钟，取上清， 置冰上待测。
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆； 8000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
(2) 血清(浆)样品：直接检测二、测定操作表：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2. 测定前将试剂一、二和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上。
3. 样本测定（按顺序加入下列试剂）
|
| 测定管 | 对照管 | 空白管 1 | 空白管 2 |
| 试剂一（μL） | 45 | 45 | 45 | 45 |
| 试剂二（μL） | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 试剂四（μL） | 35 | 35 | 35 | 35 |
| 样 品 （μL） | 18 | 18 |
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| 双蒸水（μL） |
| 2 | 18 | 20 |
| 试剂三（μL） | 2 |
| 2 |
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充分混匀，室温静置 30min 后，560nm 处测定各管吸光值 A。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，Δ
A 空白=A 空 1-A 空 2。如底部有沉淀，混匀后再行测定。注意事项：
1、试剂二为悬浊液，注意混匀后加入。
2、试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
3、样本较多时，可按表格配置工作液（包含试剂一、二、四），试剂三必须最后加入。
4、空白管 1 和空白管 2 各只需做 1~2 管；每个样本有一个对照管。
5、反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。三、SOD 活性计算：
1、抑制百分率的计算
抑制百分率＝( ΔA 空白－ΔA 测定) ÷ΔA 空白 × 100%
尽量使样品的抑制百分率在 30-70%范围内，越靠近 50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于 30% 或大于 70% ，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。
2、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50% 时，反应体系中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位。
3、SOD 酶活性计算：
（1） 血清（浆）SOD 活性（U/mL）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V 反总] ÷V 样×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ×样本稀释倍数
（2） 组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算：
a. 按样本蛋白浓度计算
SOD 活性（U/mg prot）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V 反总] ÷(V 样×Cpr)×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷Cpr×样本稀释倍数。
b. 按样本鲜重计算
SOD 活性（U/g 鲜重）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V 反总] ÷(W×V 样÷V 样总)×样本稀释倍数=11.11×抑制百分率÷( 1－抑制百分率) ÷W×样本稀释倍数。
c. 按细菌或细胞个数计算
SOD 活力（U/104 cell）=[抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×V 反总] ÷(500×V 样÷V 样总)×样本稀释倍数=0.022×抑制百分率÷( 1－抑制百分率)×样本稀释倍数。
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：加入反应体系中的样品体积，0.018mL；V 样总：加入提取液体积 1mL；Cpr：蛋白样本浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
