土壤α-葡萄糖苷酶 (S-α-GC) 活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号:JW-W-B931
规格:100T/48S
产品简介:
S-α-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中 重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
S-α-GC 能够催化对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,产物略显黄色,在400nm 有特 征光吸收。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰、 甲苯 (不允许快递) 和蒸馏水。
产品内容:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存; (自备)
试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 13mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂 仍-20℃保存;
试剂三:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
标准品:液体×1 支,5mmol/L 的对硝基苯酚溶液。
标准样品的准备:
取100μL 标准液,加入到 400μL 试剂三中,得到 1mmol/L 标准液,十倍稀释到 100 μmol/L , 用 蒸馏水倍比稀释:50 、25 、12.5 、6.25μmol/L 。100 、50 、25 、12.5 、6.25μmol/L 做标准液。
操作步骤:
1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 400nm ,蒸馏水调零。
2 、加样表
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
风干土样 (g) | 0.02 | 0.02 | - | - |
试剂一 (μL) | 10 | 10 | - | - |
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min | ||||
试剂二 (μL) | 130 | - | - | - |
试剂三 (μL) | 160 | 160 | - | - |
混匀,37℃水浴 1h 后,立即沸水浴煮沸 5min (盖紧,防止水分散失) ,流水冷却 | ||||
试剂二 (μL) | - | 130 | - | - |
充分混匀,10000g 常温离心 10min ,取上清液 | ||||
上清液 (μL) | 70 | 70 | - |
|
标准液 (μL) | - | - | 70 |
|
蒸馏水 (μL) | - | - | - | 70 |
试剂四 (μL) | 130 | 130 | 130 | 130 |
充分混匀,室温静置 2min 后,测定吸光值 A ,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一 个对照管。
标准曲线建立:根据标准管的浓度 (y) 和吸光度ΔA=A 标准管-A 空白管 (x ) ,建立标准曲线。
S-α-GC 活力的计算:
根据标准曲线,将ΔA (x ) 带入公式计算样品浓度 (μmol/L) 。
单位的定义:每天每 g 土样中产生 1μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 S-α-GC 活力 (U/g 土样) =y×V 反总÷W÷T=0.36×y
T :反应时间,1h=1/24d;V 反总:反应体系总体积:3×10-4L ;W:样本质量,0.02g。